多形核白细胞在动脉化静脉皮瓣坏死中的作用
刘春利 袁伟伟 苑凯华
【摘要】 目的 通过监测多形核白细胞(PMN)在受到各种炎性介质激活后，因呼吸爆发而发生一系列吞噬氧化反应导致细胞损伤时所产生的发光强度，进一步探讨各种炎性因素与动脉化静脉皮瓣坏死的关系。方法 测量4组不同的动脉化静脉皮瓣术后各时间段的PMN发光值，以经典动静脉皮瓣组作对照。结果 发现在动脉化静脉皮瓣成活过程中，多形核粒细胞的吞噬发光活动明显高于经典动静脉皮瓣。结论 有多形核粒细胞参与的炎性反应，在动脉化静脉皮瓣坏死过程中起着一定作用。
【关键词】 静脉动脉化皮瓣 吞噬发光
The role of polymorphonuclear neutrophile in necrosis of arterialized veuous flap Liu Chunli,Yuan Weiwei,Yuan Kaihua.The Deparment of Plastic Surgery, The General Hospital of Guangzhou Military Region, PLA. Guangzhou 510080
【Abstract】 Objective In order to investigate the role of some inflammatory media in necrosis of arterialized veuous flap, the PMN induce phagocytose luminescence and cell trauma which were activated by some inflammatory media and breathing outbreak have been studied.Methods Monitoring the PMN phagocytose luminescence of four groups of arterialized veuous flaps and a group of traditional A-V flap in different time after the operation. Results The phagocytose luminescence of PMN in the necrosis of arterializedveuous flap was discovered to be more than in the traditional A-V flap.Conclusion The PMN inflammation play some important role in the necrosis of arterialized veuous flap.
【Key words】 Arterialized flap Phagocytose luminescence
动脉化静脉皮瓣优点很多，但因其坏死率较高，而坏死的原因还不甚清楚，因此，至今不能在临床上广泛应用。从实验研究及临床应用发现，动脉化静脉皮瓣在移转后皮瓣发红、发热、肿胀等情况较经典动静脉皮瓣严重得多，更易出现皮瓣花斑、瘀血及坏死。在皮瓣移转后所发生的炎症及缺血损伤过程中有多种炎性因素参与，如多形核白细胞(PMN)受到某些炎性介质激活后导致“呼吸爆发”，发生一系列吞噬氧化反应继而导致细胞损伤。我们通过监测PMN在吞噬氧化过程中的化学发光情况，探讨其在皮瓣坏死中的某些作用。报告如下：
材料及方法
一、 动物模型及分组
1.实验动物及模型设计：本实验采用兔侧胸部动脉化静脉网皮瓣模型，以侧胸部胸外侧静脉与胸背静脉分支形成的静脉网为基础设计皮瓣，其面积约10 cm×10 cm。选用纯种日本大耳白兔，雌雄不限，体重2.5～3.0 kg。术前3天仔细脱毛，术时用2.5 %戊巴比妥耳缘静脉麻醉，沿拟手术侧前肢上臂内侧纵轴经腋窝至腋前线胸外侧静脉浅面作一弧形切口，暴露肱动脉及胸外侧静脉，结扎肱动脉在上臂的分支，从肘关节水平切断使之游离，远端结扎，近端备用。另于近腋静脉处切断胸外侧静脉，近端结扎，远端与肱动脉近端行端端吻合，胸外侧动脉亦予以结扎切断。与之伴行的胸外侧神经在切断后可再吻合，形成带神经的游离皮瓣模型。此时皮瓣上仅保留2条血管，1条是已动脉化的胸外侧静脉作为皮瓣的灌流血管，另1条是保留下来的胸背静脉作为皮瓣的回流血管。两者构成皮瓣的独立循环系统。
2.实验分组：根据皮瓣是否预制、Ⅱ期手术时间及是否应用扩张器将动物随机分为5组。实验组每组16例，对照组 8例。
Ⅰ组：静脉动脉化与皮瓣移转一次手术完成。
Ⅱ组：在Ⅰ期静脉原位动脉化的同时，在预构皮瓣区域埋置扩张器行皮瓣预制，术后10周左右预制皮瓣充分扩张后行Ⅱ期皮瓣移转。
Ⅲ组：Ⅰ期静脉原位脉动化后预构皮瓣区不埋置扩张器，仅埋置硅胶膜，术后10周行Ⅱ期皮瓣移转。
Ⅳ组：Ⅰ期手术仅埋置扩张器，术后注水，10周左右行Ⅱ期静脉动脉化皮瓣移转。
Ⅴ组：即经典动静脉皮瓣对照组。皮瓣上保留的血管为胸侧外动脉及胸背静脉，构成正常循环系统。
二、 实验方法
1.仪器：SHG-I型生物化学发光测量仪，上海技术监督局实验工厂生产。
2.酵母多糖配制：将酵母多糖以10 mg/ml的浓度溶于磷酸缓冲液，煮沸30分钟，3 000转/分离心10分钟，弃上清和Hank's液，洗两遍，配成原浓度，于4℃贮存。临用前取酵母多糖加等量兔血浆，37℃温浴30分钟，离心弃上清和Hank?s液配成原浓度。
3.Luminol溶液配制：取Luminol 17.7 mg加入100 ml Hank?s液中，超声溶解，避光4 ℃保存，用前配成0.04 mM浓度。
4.标本留取：各组实验动物均在术前耳缘静脉取血；术中完成静脉动脉化及游离皮瓣后，在皮瓣引流静脉及皮瓣动脉化静脉上再取血；术后即刻、1天、2天、3天、4天、5天、7天、10天，分别取耳缘静脉血。所有标本均在取血后3小时内测试。
5.测试：取血10ml加Hank's液1 ml，37 ℃温浴20分钟，加Luminol 1 ml，再温浴10分钟，测基础值10秒后加入0.1 ml酵母多糖，每隔3分钟测10秒钟，共20次，测发光值，计PMN数，计算发光强度(CPM/103PMN)。
结果
各组皮瓣均有PMN吞噬发光增强，术后很快上升，1～2天为高峰期，以后下降，术后6～7天又有一小高峰，术后10天恢复正常。
Ⅰ组：即静脉动脉化后皮瓣立即移转组，术前耳缘静脉取血测量发光值平均为17.82±3.97，术毕另一组取血测发光值为38.24±7.70，术后很快升高，第2天达最高为277.46±57.43，第3天开始下降，第7天PMN发光值又略有升高，第10天恢复至正常(22.58±5.83)。
Ⅱ组：即Ⅰ期静脉原位动脉化加扩张器预制，Ⅱ期皮瓣移转组。此组变化规律似Ⅰ组，但发光值较低，术前PMN发光值为19.59±4.27，术毕为43.75±7.68，术后很快上升，第2天达高峰，平均为154.56±27.07，但远较Ⅰ组为低，为Ⅰ组峰值的55.60%，以后很快下降，第7天稍回升，为80.37±16.48，第10天接近正常（25.43±5.86）。
Ⅲ组：即Ⅰ期静脉原位动脉化时不埋置扩张器，仅埋置硅胶膜，Ⅱ期皮瓣移转组。此组PMN发光值变化规律与Ⅱ组相似，仅峰值稍高达178.54±43.21，高出Ⅱ组15.52%，为Ⅰ组的64.35%。术后7天稍回升（70.03±19.23），第10天恢复正常（19.26±7.87）。
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