三七总皂甙对颅脑损伤后Ca2+、CaM含量影响的实验研究
韩金安 匡永勤 周虎田 孙增会 李开慧 胡威夷
【摘要】 目的 探讨三七总皂甙（PNS）对颅脑损伤后脑组织中Ca2+、CaM含量的影响及其对颅脑损伤后的治疗效应。方法 干湿法测定脑组织含水量，放免法、原子吸收分光光度法测定血及脑组织中 Ca2+、CaM含量；分析PNS对上述指标的影响。 结果 PNS能显著降低颅脑损伤后血与脑组织中Ca2+、CaM含量，减少脑组织含水量及伊文思蓝染范围。结论 PNS 能阻滞脑损伤后神经细胞内钙超载，阻断Ca2+-CaM复合物形成，减轻脑水肿和血脑屏障通透性，对颅脑损伤具有一定的脑保护作用。
【关键词】 三七 钙 钙调蛋白 脑损伤
Effect of Panax Notoginseng Saponins on the Change of Ca2+, CaM Contents Following Brain Injury
HAN Jinan*, KUANG Yongqin, ZHOU Hutian, et al.
* Dept. of Neurosurgery, 477th Hospital of PLA, Xiangfan, 441003
【Abstract】 Objective To study the effects of the panax notoginseng saponins (PNS) on the changes of Ca2+, CaM content and the brain protective effects after brain injury. Methods A model of local cerebral injury on rabbits was set up by a drop of 100 g weight at 20 cm height hitting on the left epidura, then 100 mg/kg PNS was intravenously injected at 30 min and 12 h after brain injury. The contents of Ca2+, CaM in blood and brain tissue were measured by atonic absorption spectrometry and radioimmunoassay. Results PNS significant reduced Ca2+, CaM contents both in blood and cerebral tissue (P<0.01). Conclusions PNS can reduce Ca2+， CaM contents in brain tissue, block Ca2+ overload in neurons, consequently inhibit the production of Ca2+-CaM compound that causes neurons damage. PNS has a protective effect on brain injury.
【Key words】 Panax notoginseng saponins Calcium Calmodulin Brain injuries
颅脑损伤后神经元和(或)神经胶质细胞膜系统的钙通道开放、细胞内钙超载、钙调蛋白激活（CaM），是导致继发性脑损害、脑水肿发生的关键［1］。三七总皂甙（panax notoginseng saponins, PNS）可减少缺血后脑组织中钙含量达到脑保护作用，现已用于防治脑缺血性损害［2］。笔者旨在通过观察PNS对颅脑损伤后脑组织中Ca2+、CaM含量及脑含水量变化的影响，探明PNS对颅脑损伤后的脑保护作用及可能作用机制。
材料与方法
一、 实验动物及分组
选用体重（2.30±0.40）kg的健康成年日本大耳白兔54只（四川省医药实验动物管理中心提供），雌雄不限。伤前随机分为3组：致伤组、致伤治疗组和对照组各18只。其中，每组10只用于观察Ca2+、CaM含量变化，又分为4个时相即伤前、伤后1，8，24小时，另8只处死前2小时股静脉注射3%伊文思蓝（EB）溶液25 mg/kg，用于观察脑含水量和血脑屏障(BBB)通透性。
二、 模型制备
参照袁绍纪等［3］的方法，略做改良。动物麻醉后，固定头颅和躯干、切开左额顶头皮，制1 cm×1 cm大小颅骨窗，硬膜保持完整，将撞杆置于硬膜外，用电磁原理吸引与释放100 g重的砝码，下落20 cm撞击撞杆（长3 cm、直径0.8 cm）使之下移0.4 cm致左额顶部脑挫裂伤。受力面积0.64 cm2，致伤冲量以100 g×20 cm为参数，对照组仅作骨窗，不致伤。
三、 给药方法
PNS粉剂（昆明制药厂提供）用注射用水配成质量浓度5%的溶液。治疗组伤后30分钟及12小时分别给予PNS 100 mg/kg与质量浓度50 g/L葡萄糖液25 ml/kg，缓慢静脉滴注。致伤组和对照组以同样的方式给予质量浓度50 g/L葡萄糖液25 ml/kg静脉滴注，观察24小时。
四、 检测指标和方法
（1）Ca2+检测：分别于伤前、伤后各时相经股静脉取血2 ml，2000 r/min离心3分钟，取血清低温保存。动物伤后24小时处死，于伤灶边缘取脑（200±10）mg，烘烤（100℃）24小时至恒重，取10 mg烘干组织用3 ml浓硝酸消化48小时，重蒸水稀释10倍，保存待测。用WYX-402型原子吸收光谱仪，波长42.17nm，分别测定血清和脑组织中总Ca2+含量。（2）CaM检测：分别于伤前、伤后各时相取静脉血2 ml，抗凝，2 500 r/min离心3分钟，分离血浆，煮沸5分钟，迅速冷却，-35℃保存。伤后24小时处死，于伤灶边缘取脑200 mg，用Tris-HCI液冰溶下制匀浆，4 500 r/min离心50分钟，取上清液煮沸5分钟，以同样速度离心30分钟，取上清液保存待测。采用放免法，利用磷酸二酯酶（PDE）系统测定 CaM计数。药盒由中科院药理所提供，步骤参照文献［4］及药盒说明书进行。（3）脑组织含水量及EB蓝染范围的测定：伤后24小时部分动物断头取脑，弃去小脑、嗅脑及脑干，纵裂切开两大脑半球，滤纸吸去表面液体，分析天平称左、右半球湿重（室温15～20℃，湿度70%～90%）。伤侧半球显微镜下测量表面蓝染直径。将脑组织置于恒温烤箱中，用100℃、24小时烘干至恒重。按Elliot公式计算脑含水量。
五、 数据统计学处理
采用SPRM统计程序包，对数据进行单因素、双因素方差分析及相关系数的显著性检验，数据以±s表示。
结 果
一、 伤后不同时相血中Ca2+、CaM含量的变化
致伤组伤后血Ca2+、CaM含量持续性升高。治疗组各时相血CaM与对照组相差不显著，伤后24小时血Ca2+略有升高。见表1。
二、 伤后24小时脑组织Ca2+、CaM含量的变化
见表2。
三、 伤后24小时含水量与EB蓝染范围的变化
见表3。
表1 3组动物各时相血清 Ca2+、血浆CaM含量变化比较（mmol/L,±s）
组别 兔数 Ca2+［伤后时间（h）］ CaM［伤后时间（h ）］
0 1 8 24 0 1 8 24
致伤组 10
3.16±0.25
3.28±0.57
8.96±0.72*△
5.19±0.93(**△)/(△▲▲)
6.89±1.23
6.88±1.32
14.23±2.35(**△)/(△▲▲)
17.56±2.79(**△)/(△▲▲)
治疗组 10 3.12±0.30 3.23±0.48 3.38±0.51 3.47±0.49*△ 7.55±1.57 7.67±1.45 8.16±1.76 9.20±1.92
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