颌面部爆炸伤愈合过程中血管相关生长因子变化和作用的实验研究
张从纪 李慧增 周树夏 杨军 孙远 史文进
摘 要：目的 探讨颌面部软组织爆炸伤愈合过程中血管内皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在伤口液中含量的动态变化及其对创伤愈合中血管再生过程的刺激作用。 方法 采用改进的家兔颌面部爆炸伤动物模型，以KTY-04型雷管为爆炸源，复制颌面部爆炸损伤，选用聚乙烯醇（PVA）海绵收集伤口液，双抗体夹心酶(ELISA)法检测VEGF和bFGF含量。 结果 VEGF含量在伤后第1周内稳步上升，伤后1～2 d 与正常血清组比较，差异显著(P<0.05)，3 d 达(2.9±2.7) μg/L，差异非常显著(P<0.01)， 7 d 达峰值。bFGF含量伤后6 h 即达峰值［(565±436) ng/L］,之后迅速下降，于伤后3～5 d基本恢复正常血清水平，伤后7 d 略有上升。 结论 VEGF 和bFGF参与颌面部爆炸伤愈合过程中血管再生的两个不同阶段，二者有协同作用，bFGF刺激启动血管再生，并诱导VEGF的合成，VEGF则调节和维持血管的再生过程。
关键词：生长因子，内皮，血管； 成纤维细胞生长因子，碱性； 颌面损伤； 爆炸伤
A study of change and effect of angiogenic growth factors during maxillofacial blast wound healing
ZHANG Congji LI Huizeng ZHOU Shuxia, et al.
（Dept. of Stomatology, Southwest Hospital, The Third Military Medical University, Chongqing 400038， China）
Abstract：Objective To determine the content change of vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) in the wound fluid and their effect on angiogenesis in the wound healing during healing of maxillofacial soft tissue blast injury. Methods The improved rabbit model of maxillofacial blast injury was made by KTY-04 blasting cap. The contents of VEGF and bFGF in the wound fluid were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Such fluid was collected by Polyvinyl alcohol (PVA) sponge. Results In the wound fluid of maxillofacial blast injury, the content of VEGF was rising steadily in the first week after injury. Compared with natural sera, it showed difference from the first day after injury, obvious difference from the third day (P<0.01) when the content was (2.9±2.7) μg/L. The peak appeared at the seventh day. The bFGF in wound fluid reached the peak value (565±436) ng/L, 6 hours later. Then, it declined near to natural serum level 3-5 days after injury, and then moved up slightly seven days later. Conclusions VEGF and bFGF took part in two angiogenic phases with synergistic action in maxillofacial blast injury. The bFGF stimulated the initial angiogenesis and induced production of VEGF. VEGF regulated and maintained vascular regeneration.
Key words：Growth factor， endothelial, vascular； Fibroblast growth factor, basic; Maxillofacial injuries; Blast injuries▲
颌面部爆炸伤是平时意外事故以及战伤的主要伤类。如何促进创伤愈合，缩短疗程，一直是口腔颌面外科的研究重点。颌面部爆炸伤的愈合包括纤维组织形成、胶原沉积和血管再生等过程。其中血管再生是创伤愈合过程中的重要一环。血管再生相关因子：血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）以及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)在此过程中具有广泛的调节作用。VEGF可以特异作用于内皮细胞，促进其增殖，并提高血管通透性和改变细胞外基质［1，2］。bFGF作用广泛，在多种细胞中发挥调节作用，特别是能够刺激内皮细胞增殖和新生血管的生成［3，4］。已有研究证实，VEGF 和bFGF参与了胚胎发育、肿瘤生长，创伤愈合等多种生理和病理过程［2，3，5，6］。然而，对于它们在颌面部爆炸创伤中含量变化和作用目前尚不清楚。为此，笔者观察了bFGF和VEGF在家兔颌面部爆炸伤伤口液中的含量变化及其对创伤愈合过程的影响作用。
材料与方法
1. 实验动物和分组：选用新西兰白兔60只，雌雄不拘，体重2.0～2.5 kg，平均2.1 kg。随机分为伤后6 h, 1, 2, 3, 5, 7 d 组，每组10只。 实验前进行1周饲养，实验前3天连续测体温、脉搏、呼吸，经统计学分析，个体间无明显差异。
2. 家兔颌面部爆炸伤动物模型的制备：根据我科建立的颌面部爆炸伤动物模型［7］加以改进。采用我科与八四五厂合作研制的KTY-04型瞬发纸质电雷管为爆炸源。雷管外径8.4 mm，内径6.2 mm， 长度54 mm，导线长2 m。其爆炸参数为爆热 5 066 J/g，爆轰气体体积为620 ml/g，爆炸释放能量为2 026.4 J。家兔以质量浓度为30 g/L的戊巴比妥钠（30 mg/kg）静脉麻醉，面部剪毛备皮，俯卧于致伤架上，头偏向一侧。将雷管置于距侧面平面颊部5 cm处，雷管长轴垂直于表面皮肤。以4.5 V直流电引爆雷管，造成面颊部软组织缺损性创伤，伤口大小平均为3 cm×4 cm×4 cm,与口腔有无相通。
3. 伤口液标本的采集:动物致伤后立即清创缝合，以体积分数为0.03的过氧化氢与等渗盐水交替冲洗伤口，切除坏死组织，如有伤口与口腔相通则先行关闭口内伤口，分层缝合肌层、皮下和皮肤，在皮下层放置4个直径为1.0 cm，厚0.5 cm的聚乙烯醇（plyvinyl alcohol,PVA）海绵。PVA海绵置入前经流水漂洗过夜，煮沸30 min消毒，置入时先浸入无菌等渗盐水中。于各时相点取出PVA海绵，同一时相组中，每8个PVA海绵合为1个标本，离心，取上清，-70℃保存［8］。对照组标本来源：动物于伤前1天取血清作为正常对照。
4. VEGF及bFGF含量的测定：VEGF和bFGF测定应用双抗体夹心酶(ELISA)法，VEGF ELISA试剂盒以及bFGF ELISA试剂盒由美国Santa Cruz生物试剂公司提供，灵敏度为1.0 ng/L。操作按说明书进行。每个标本检测2次，取其平均值。
5. 实验数据处理: 所有数据均用均数±标准差表示。统计学处理应用SPSS for Win
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