nm23蛋白和雌激素受体的表达与大肠癌预后的关系
秦自科 万德森 连俊彦 林汉良 候景辉
【摘要】 目的 探讨nm23蛋白及雌激素受体（ER）的表达与大肠癌患者临床生物学行为及预后的关系。 方法 采用免疫组织化学方法（LSAB），对209例大肠癌标本分别进行nm23蛋白和ER的检测，并结合患者的临床资料进行分析。 结果 大肠癌组织nm23蛋白的表达水平与ER的表达水平呈明显正相关（r=0.5319，P<0.01）。nm23蛋白及ER的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、大体类型、组织类型、Dukes分期等无关（r<0.4，P>0.05）；用Cox回归模型进行多因素生存分析表明，大肠癌组织nm23蛋白及ER的表达水平与患者预后明显相关（P<0.01），即nm23蛋白和（或）ER表达水平越高，患者预后越好。 结论 大肠癌nm23蛋白的异常表达与雌激素代谢紊乱有关，nm23蛋白和ER的检测有助于大肠癌患者的临床诊断及预后评估。
【关键词】 结肠直肠肿瘤； 基因，抑制，肿瘤； 受体，雌激素； 免疫组织化学； 预后
Expression of nm23 protein and estrogen receptor and prognosis of colorectal cancers
QIN Zike WAN Desen LIAN Junyan et al
（Cancer Center, Sun Yat-sen Medical University, Guangzhou 510060, China）
【Abstract】 Objective To explore the relationship between clinicobiological action and expression of nm23 protein and estrogen receptor(ER) for colorectal cancer. Methods The expression of nm23 protein and ER for 209 cases of colorectal cancer was detected by immunohistochemistry assay(LSAB). Results The expression of nm23 protien was correlated with that of ER for colorectal cancer(r=0.5319, P<0.01). The expression of nm23 protein and ER in colorectal cancers was not related with patient′s age, sex, tumor position, pathological type, histological type, and Dukes stage (r<0.4，P>0.05). The expression was related with the prognosis of colorectal cancer (P<0.01). The higher the expression of nm23 protein and/or ER the better the prognosis, whereas the less the expression of nm23 protein and/or ER the worse the prognosis. Conclusions The abnormal expression of nm23 protein is correlated with the disturbance of estrogen metabolism in colorectal cancer. The detection of nm23 protein and ER is helpful for the diagnosis and prognostic evaluation of colorectal cancer.
【Key words】 Colorectal neoplasm; Genes, soppressor, tumor; Receptor, estrogen; Immunohistochemistry; Prognosis
大肠癌由于其临床及病理特征的不同，其治疗措施以及预后也明显不同。因此，准确地把握每例大肠癌的特征对其临床诊断和处理具有十分重要的意义。本研究通过检测大肠癌组织nm23蛋白和雌激素受体（ER）的表达状况，探讨它们与大肠癌发生发展的内在联系及其在临床中的实际应用价值。
资料与方法
1．标本来源：本研究209例大肠癌组织标本取自1977年6月至1986年9月在我院接受根治性手术治疗的住院患者。其中男性129例，女性80例；患者年龄22～76岁，平均为50.6岁；Dukes′ A期19例、B期106例、C期84例。全部肿瘤标本经病理证实为结、直肠腺癌，其中直肠癌139例、结肠癌70例。组织块统一采用10%的福尔马啉溶液固定，石蜡包埋，组织切片厚度为5 μm。
本组病例均获随访，时间最长的262.8个月（21.6年），平均随防（132.8±44.2）个月。死亡96例，存活113例。
2．检测方法：本研究采用免疫组织化学方法(LSAB)试剂盒由美国Santa Cruz公司提供。操作步骤：切片于二甲苯中脱蜡，分别在95%、75%、50%乙醇中逐步水化；以浓度为20 mg/L的蛋白酶K消化30 min；再用3%H2O2封闭内源性过氧化物酶30 min；于98 ℃下微波处理10 min；加正常牛血清封闭30 min；滴加一抗（nm23蛋白和ER抗体工作浓度分别为1∶80和1∶60），于4 ℃孵育过夜；加生物素化的二抗，室温放置30 min；用LSAB复合物染色30 min；再用新配制的3,3二氨基联苯胺（DAB）溶液（pH7.4 ～7.6）显色5 min；苏木素复染及树脂封片。
3．结果的判断：光镜观察，以细胞浆或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞。制片后24 h内阅片，阅片医师不知道患者的临床资料及随防结果。高倍镜下（10×40倍）随机计数5个视野，计算阳性细胞数所占总细胞数的百分比，依次分为5个等级，即阴性（-）：阳性细胞数≤20%；阳性（+）：（+）阳性细胞数为21%～40%，（++）阳性细胞数为41%～60%，（+++）阳性细胞数为61%～80%，（++++）阳性细胞数>80%。
4．统计方法：相关分析用Spearmen相关分析；生存分析用COX比例风险回归模型进行。
结果
1．nm23蛋白和ER在大肠癌组织中的表达：nm23蛋白和ER主要在癌细胞浆内表达，其中nm23蛋白的表达随肿瘤浸润深度增加而减少。nm23蛋白和ER的表达水平呈明显正相关（r=0.5319，P<0.01）。nm23蛋白和ER的表达水平及其与临床病理之间的关系见表1。
2．nm23蛋白和ER的表达与大肠癌临床生物学行为的关系： 本研究利用单因素相关分析，结果显示：nm23蛋白和ER的表达水平与大肠癌患者年龄、性别、肿瘤部位、大体类型、组织学类型以及Dukes分期等均无明显相关性（r<0.4，P>0.05）。
3．nm23蛋白和ER的表达水平对大肠癌患者生存率的影响：本组患者行根治性术后5年生存率为65.13%，半数生存期为8.6年，10年生存率为45.69%。利用COX回归模型进行多因素生存分析表明，nm23蛋白和ER的表达与结、直肠癌患者预后均明显相关，差异有极显著性意义（P<0.01）。nm23蛋白和（或）ER表达越强其患者预后越好；相反，nm23蛋白和（或）ER的表达越少则患者预后越差。
讨论
nm23(nometastatic gene 23)基因发现于1988年，证实为一种mRNA，位于第17号染色体长臂靠近着丝粒的位置［1］。nm23基因正常表达不但能抑制肿瘤的转移，而且还能间接抑制肿瘤的形成［2］。关于大肠癌nm23基因的研究不多，国外多数学者认为nm23基因的表达水平与结、直肠癌患者远处转移密切相关［3］。有关雌激素受体的研究在乳腺癌中较为成熟，由于大肠癌与乳腺癌具有许多相似的流行病学特点，有学者推测，雌激素代谢的紊乱可能与大肠癌的发生、发展有着密切联系。
表1 本组大肠癌组织nm23蛋白和ER的表达
状况及与临床病理的关系（例）
临床资料 例数 nm23蛋白 ER
- + - +
总例数 209
61
49
36
43
20
89
36
40
28
16
年龄（岁）
<50 119 45 20 25 16 13 51 20 22 16 10
≥50 90 31 20 19 15 5 38 16 18 12 6
性别
男 129 53 23 20 20 13 57 24 20 20 8
女 80 23 17 24 11 5 32 12 20 8 8
肿瘤部位
结肠 70 31 12 20 5 2 45 7 11 5 2
直肠 139 45 28 24 26 16 44 29 29 23 14
肿瘤类型
溃疡型 135 51 25 31 17 11 71 20 24 12 8
增殖型 55 22 11 10 9 3 15 13 11 11 5
浸润型 19 3 4 3 5 4 3 3 5 5 3
组织类型
乳头腺癌 40 12 10 13 3 2 12 12 9 5 2
管状腺癌 131 45 24 16 30 14 71 13 23 14 10
粘液腺癌 38 9 10 7 10 2 6 11 8 9 4
Dukes分期
A期 19 6 3 6 4 0 5 4 6 3 1
B期 106 50 14 16 7 9 61 11 15 10 9
C期 84 20 13 22 20 9 23 21 19 15 6
本研究结果显示：nm23蛋白和ER均主要在细胞浆内表达，其中nm23蛋白表达随肿瘤浸润深度增加而减少，提示nm23蛋白的异常表达可能与肿瘤细胞浸润和转移的形成有关；大肠癌nm23蛋白和ER的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、大体类型、组织学类型以及Dukes分期等均无明显相关性，但nm23蛋白的表达与ER的表达呈明显的正相关。说明在大肠癌的发生发展过程中，雌激素水平的变化与nm23基因的表达存在一定的内在联系，即雌激素含量较多（激素依赖）的细胞其nm23基因表达较高，而雌激素水平较低（非激素依赖）的细胞其nm 23基因表达则较少。
有关大肠癌组织nm23蛋白和ER表达与疾病预后关系的研究不多，且结论尚未统一。Royds等［4］用免疫组织化学方法检测大肠癌组织nm23蛋白的表达水平，结果提示nm23蛋白的表达与预后无关。国内有研究表明，大肠癌ER的表达与预后呈明显负相关，即ER表达水平越高，患者的预后则越差［5］。本研究利用Cox回归模型对209例大肠癌患者的长期随访结果进行多因素生存分析，结果显示在结、直肠癌的患者，nm23蛋白和ER的表达均与其预后有关。随着nm23蛋白表达的减少，肿瘤细胞不断恶化以致浸润、转移，预后相应较差；同样，ER的表达降低，说明肿瘤细胞属非激素依赖性，肿瘤不容易控制，同样预后不佳。
正常情况下，人体各种细胞均有一定量的nm23蛋白表达，其主要生理功能是参与细胞内信息的传递，它对维持细胞正常的生理过程有着及其重要的作用。nm23蛋白表达减少可导致细胞恶变以及肿瘤浸润、转移的形成［6］。雌激素是通过与ER的结合，在基因水平上调节细胞的结构和功能变化。ER的改变，可引起雌激素功能的改变，导致细胞原癌基因（如ras癌基因）或抑癌基因(如nm 23基因)等发生突变，使这些基因的表达产物-蛋白质发生质或量的改变，细胞逐渐恶变、进展［7］。本研究结果显示：ER与nm23蛋白的表达水平呈正相关，说明大肠癌雌激代谢水平的紊乱与nm23基因的表达状况紧密联系，其具体过程及机理有待进一步研究阐明。
作者单位：秦自科（广州，中山医科大学肿瘤防治中心 510060）
万德森（广州，中山医科大学肿瘤防治中心 510060）
林汉良（广州，中山医科大学肿瘤防治中心 510060）
侯景辉（广州，中山医科大学肿瘤防治中心 510060）
连俊彦（顺德市顺德医院）
参考文献
1，Steeg PS, Bevilacqua G, Kopper L, et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential.J Natl Ccncer Inst,1988,80:200-204.
2，Postel A,Berberich SJ,Flint SJ,et al. Human c-myc transcription factor Puf identified as nm23-H2 nucleoside diphosphate kinase， a candidate suppressor of tumor metastasis. Science, 1993, 261: 478-480.
3，Yamaguchi A, Urano T, Fushida S, et al. Inverse association of the nm23-H1 expression by colorectal cancer with liver metastasis.Br J Cancer, 1993,68:1020-
024.
4，Royds JA,Cross SS,Silcocks PB,et al. nm23 anti-metastatic gene product expression in colorectal carcinomas. J Pathol, 1994,172:261-266.
5，赵家宏，董新舒，王凤君，等.影响直肠癌预后因素的新探讨.实用肿瘤学杂志，1996，1：10-12.
6，Florenes VA,Amdal S,Myklebost O,et al.Levels of nm23 messenger RNA in metastatic malignant medanomas: inverse correlation to disease progression. Cancer Res, 1992, 52: 6088-6091.
7，Harrison JD,Watson S,Morris DL. The effect of sex hormones and tamoxifen on the growth of human gastric and colorectal cancer lines. Cancer, 1989, 63:2148-2151.
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