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标题: 组织蛋白酶D在膀胱移行细胞癌中的免疫组化研究 [打印本页]

作者: 大江 时间: 2014-10-2 07:39
标题: 组织蛋白酶D在膀胱移行细胞癌中的免疫组化研究
顾晓　眭元庚　徐正铨　尤国才　吴宏飞

摘　要：目的：探讨组织蛋白酶D(CD)的表达与膀胱移行细胞癌(BTCC)的生物学行为之间的关系。方法：应用免疫组织化学ABC法对33例BTCC及12例正常膀胱组织中CD抗原进行检测。结果：正常膀胱组织移行细胞均呈弱阳性表达，BTCC肿瘤细胞中-强阳性表达率为48.48%，显著高于正常对照组(P＜0.05)，且在不同病理分级与临床分期、单发与多发、初发与复发之间均有显著性差异(P＜0.05)。结论：CD表达与BTCC生物学特性密切相关；CD通过降解天然屏障在肿瘤浸润转移过程中起重要作用。
关键词：组织蛋白酶D　膀胱肿瘤　移行细胞癌　免疫组织化学

Expression of cathepsin D in human transitional cell carcinoma of bladder

GU Xiao
（Department of Urology, the First People′s Hospital of Shanghai, Shanghai, 200080）
SUI Yuan-geng　XU Zeng-quan　YOU Guo-chai　WU Hong-fei
（Department of Urology, the First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University）

Abstract：Purpose:To evaluate the relationship between the expression of Cathepsin D (CD) and biological behavior of BTCC. Methods: 33 paraffin embedded tissue specimens of BTCC were examined by the standard ABC immunohistochemical technique. Results: The results revealed that all normal transitional cells were weakly stained, and the moderately or strongly positive rate of CD in BTCC group was significantly higher than in normal control group (P＜0.05). Fisher′s accurate analysis showed that over expression of CD in tumor cells closely correlated with different pathological grades(P＜0.05), clinical stages(P＜0.05), number of lesions (P＜0.05) and postoperative recurrence (P＜0.05). Conclusions: It was suggested that over expression of CD closely correlated with grades and stages and it may played a important role on the process of invasiveness and metastasis of BTCC by lowering the function of natural defenses.
Key words：Cathepsin D　Neoplasm of bladder　Transitional cell carcinoma　Immanohistochemy▲

　　膀胱移行细胞癌(Bladder transitional cell carcinoma,BTCC)的生物学行为较复杂，浸润性是其中的突出表现之一。研究表明，蛋白水解酶通过降解一系列的天然屏障在肿瘤的浸润转移中起重要作用。组织蛋白酶D(Cathepsin D，CD)是参与此过程的重要因素之一。有关乳腺癌、结肠癌、前列腺癌的研究已证实CD含量与其生物学特性密切相关〔1，2〕。但CD与BTCC关系的研究报道甚少，且尚无一致的结论。本文旨在通过检测CD在BTCC中的表达，探讨CD与BTCC生物学行为之间的关系及肿瘤浸润转移的机制。

1　材料与方法

1.1　分组
　　BTCC组：取本院1995～1997年间手术切除并经病理检查证实为BTCC的存档蜡块标本33例，男25例，女8例，年龄38～81岁，平均60.8岁。按WHO病理分级：Ⅰ级10例，Ⅱ级15例，Ⅲ级8例；按UICC-TNM临床分期：Ta～T1 16例，T2～T4 17例。肿瘤单发18例，多发15例；初发19例，复发14例。
　　正常对照组：取其他原因死亡的尸体膀胱组织12例，年龄19～49岁，平均23.7岁。
1.2　检测方法
　　一抗为美国DAKO公司兔抗人CD多克隆抗体，二抗为美国Vector公司生物素化抗兔IgG试剂盒。每例标本常规连续石蜡切片2张，片厚5 μm。一张作常规HE染色，进行组织形态学观察，复核病理诊断、分级和分期，结合免疫组织化学染色观察抗原定位；另一张作CD免疫组织化学ABC法染色。一抗和二抗稀释度均为1∶100，DAB作为底物显色。以乳腺肿瘤组织作阳性对照，以其他原因死亡的尸体膀胱组织作正常对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
1.3　结果判定标准
　　光镜下细胞结构清晰，胞浆内有棕黄色颗粒且着色明显高于背景者为阳性。将染色结果分为阴性(染色细胞数≤5%)、弱阳性(染色细胞数＞5%～25%)、中-强阳性(染色细胞数≥25%)。阳性结果由三位独立的评估者得出一致的结论决定。
1.4　统计学处理
　　本研究结果均为半定量分析的计数资料，应用Pentium-133型计算机SAS 6.04软件包处理实验数据，作Fisher精确概率χ2检验。

2　结果

　　CD在正常膀胱组织的移行细胞胞浆内均呈弱阳性表达，尤其表层伞形细胞呈阳性染色。CD抗原在BTCC组织中呈棕黄色颗粒，分布于肿瘤细胞和间质巨噬细胞胞浆，其肿瘤细胞中-强阳性表达率为48.48%，显著高于正常对照组(P＜0.05)。
　　肿瘤细胞CD表达与BTCC病理分级与临床分期、单发与多发、初发与复发之间的关系见表1。

表1　肿瘤细胞CD表达与BTCC各分类之间的关系

分类肿瘤细胞CD表达 P值
(Fisher精确概率)
弱阳性中-强阳性
病理分级
　Ⅰ级
　Ⅱ级
　Ⅲ级 9
6
2 1
9
6 0.010
临床分期
　Ta～T1
　T2～T4 12
　5 　4
12 0.015
单发
多发 13
　4 　5
11 0.015
初发
复发 14
　3 　5
11 0.005

　　由表1可知，不同病理分级和临床分期的肿瘤细胞中CD中-强阳性表达率有显著性差异(P＜0.05)，且随恶性和浸润程度增高而增加。复发与多发肿瘤CD中-强阳性表达率分别显著高于初发和单发肿瘤(P＜0.05)。
　　间质巨噬细胞CD表达与BTCC不同病理分级与临床分期之间的关系见表2。
表2　间质巨噬细胞CD表达与BTCC不同病理分级和临床分期之间的关系

分级与分期间质巨噬细胞CD表达 P值
(Fisher精确概率)
弱阳性中-强阳性
　病理分级
　Ⅰ级
　Ⅱ级加Ⅲ级　3
13 　7
10 0.26
　临床分期
　Ta～T1
　T2～T4 　5
11 11
　6 0.12

　　由表2可知，表浅性BTCC中间质巨噬细胞CD中-强阳性表达率为68.75%，高于浸润性BTCC的35.29%；Ⅰ级CD中-强阳性表达率为70.00%，高于Ⅱ级加Ⅲ级的43.48%，但均无显著性差异(P＞0.05)。

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