血管铸型观察bFGF对大鼠颌面部移植脂肪新生血管的影响

廖天安 王琼超 谢富生 常杰 Observation on the function of basic fibroblast growth factor in free fat graft revascularization of maxillofacial region by vascular cast Liao Tiannan,Wang Qiongchao,Xie Fusheng,et al 【摘要】 目的 为探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在自体游离脂肪中血管形成的 作用。方法 以SD大鼠双侧嚼肌区皮下作为受植床，取腹股沟区脂肪切碎后，实验侧加 入bFGF，并以纤维蛋白作为bFGF的缓释剂；对照侧加入单纯纤维蛋白进行移植。术后7天， 经心脏主动脉插管，以液体铸型材料甲烯丙烯酸甲脂、丙烯酸甲酯灌注制作移植体血管制作后， 在JSM-T300型扫描电镜下观察血管走向、形态并计量分析。结果 移植脂肪内血管多从颈 向头方行走，皮肤侧比嚼肌侧丰富，实验侧大量血管呈芽突状，芽突顶端及侧方有深而长的 椭圆或圆形内皮细胞核压迹，新生血管明显偏粗。结论 bFGF作为外源性因子加入自体游离 移植脂肪内可诱导血管长入，增加移植组织中血管的数量及增大新生血管直径的作用。 【关键词】 脂肪移植 碱性成细胞生长因子 血管铸型 Observation on the function of basic fibroblast growth factor in free fat graft revascularization on maxillofacial regionby vascular cast Liao Tianan,Wang Qiongchao,Xie Fusheng,et al.Department of Stomatology, Hai Nan People?s Hospital, Hai Nan 570311 【Abstract】 Objective To search the function of basic fibroblast growth factor (bFGF) in vascularization of auto-free grafting.Method Bilateral subcutaneous masseteric muscle region were used as the transplant beds. The fat graft obtained from the inguinal region which were granulated and mixed with only fibroprotein of the contrast side and fibroprotein containing with basic fibroblast growth factor (bFGF) of the experimental side.The vascular casts of graft were prepared by methacrylate and methyl methacrylate monomar through intubation to aorta via the heart 7 days postoperatively. The shape, quantity and direction of revascularization were studied by JSM-T300 scanning electron microscopy.Result The direction of vesselsin graft went mainly from neck to head. It was more abundance on subcutaneous tissue than adjacent muscular side. There were a great number of vascular buds as predminant source of new vessels with spheriodal or spherical impressions of nuclei of endethelial cells on ends or lateral sides of vascular casts, and the dimensions of vessels on test sides were larger than contrapositive sides. Conclusion The bFGF added to graft could stimulate it revascularization and increased quantity and size of new vessels. 【Key words】 Fat grafting bFGF Vascular casts 碱性成纤维细胞生长因子(b fibroblast grouth factor,bFGF) 80年代被单独分离 后，其促进血管内皮细胞生长，刺激细胞分裂的作用及机理，在细胞培养中已受到广泛重视 ［1～3］，但在活体上进行实验研究的报道尚不多见。本实验试图通过血管铸型和扫描电镜观 察，探讨bFGF在自体游离脂肪移植中血管形成的作用。 材料与方法 一、动物及手术：SD大鼠5只，雄性，体重250～300 g 。3 %戌巴比妥钠0.1～0.12 ml/100 g腹 腔注射全麻下，常规脱毛，消毒铺巾。双侧下颌角下方作5 mm长切口，分离嚼肌与皮肤为受植区。 取腹股沟脂肪，用2 ml注射器接16号针头反复推压2～3次抽取。双侧植入前进行预处理：实验侧植 入脂肪0.2 g,加入5 000 mg/100 ml纤维蛋白原(海南医学院蛋白研究所制备)20 μl，纤维蛋白原 中含有2 μg与蛋白结合的bFGF(东大海特生物工程有限公司提供)，混匀，加入125 μ/ml凝血酶 10 μl，注入实验侧受植床；对照侧植入0.2 g脂肪，所用纤维蛋白原不含bFGF，操作同实验侧。 伤口缝合，术后7天处死动物。 二、血管铸型标本制作及观察方法 1.单体洗涤及冷贮：将甲烯丙烯酸甲酯(Ⅰ液)及丙烯酸甲酯(Ⅱ液)分别以3 %NaOH洗涤 3次，蒸镏水洗涤3次，以去除阻聚剂，在洗涤后的Ⅰ液、Ⅱ液中分别加石膏吸收残留水份， 过滤。将Ⅰ液、Ⅱ液按9∶1比例混合，80℃水浴6分钟，流水冷却，冷贮备用。 2.铸型制作：动物在全麻下开胸，经心脏主动脉插管，以100～120 mmHg压力，生理盐水 (含肝素2 500 μ/100 dl；罂栗碱150 mg/100 ml)灌洗至血液清澈，再用1 %戌二醛50 ml灌注 后维持30分钟。甲烯丙烯酸甲脂50 ml灌注，以驱去血管中水份，40 ml预聚液加入二甲基苯酰 0.4 ml充分摇匀，立即灌注，此时从右心房流出的先为甲烯丙稀酸酯，遇水呈油状，随后铸型 液流出，遇水可形成硬膜。结扎心蒂，静置3天，解剖动物见移植物有光滑被膜包囊，沿被膜外 剪断与周围组织联系的铸型血管，取出移植体，置6N KOH腐蚀3天。手术显微镜下，注射器缓缓 冲洗溶解组织残渣。凉干后便获血管铸型标本。 3.扫描电镜观察：整个标本粘附于铜台上，真空喷金，在JSM-T300型扫描电镜下观察 血管形态并作计量分析。计量方法：每个标本取4个限象及中心，以同一放大倍数(145倍)摄 像5张(每张照片相当于标本实际面0.27 mm2)，每张照片中心画“+”字，计算每个标本5张照 片与“+”字交叉的血管总和并按管径大小分类。 结 果 在手术显微镜下可见血管铸型标本血管呈枝网状、粗细不等。血管主要从颈向头方向及周边向 中央行走。皮肤侧血管较嚼肌侧丰富。电镜下，移植体皮肤侧血管多呈水平方向，嚼肌侧 可 见较多的从浅面向深面行走的血管及芽突，血管多源于皮肤侧。同时可见周边及表面有明显 的动静脉伴行，移植物中血管交叉紊乱。典型的动静脉少见，血管处于发育分化状态(图1)。     更多相关文档请点击>>影响(3274)新生(139)血管(1952)移植(804)脂肪(222)实(24)bFGF(38)对大(455)观察(3338)