凋亡相关基因产物Fas/APO-1和bcl-2蛋白在肾癌组织中的表达及意义

李宏军　俞莉章　杨宝龙　孔祥田　宓培　郭应禄 　　【摘要】　目的　研究凋亡相关基因Fas/APO-1和bcl-2 在肾癌发生发展中的作用。　方法　采用免疫组织化学法对35例肾癌组织和26例远离肾癌的正常肾组织Fas/APO-1和bcl-2蛋白的表达进行检测。　结果　肾癌组织Fas/APO-1蛋白表达率为57.14 %，明显低于正常肾组织中的表达率（84.62 %，P<0.05），且表达强度也明显低下；而bcl-2蛋白表达率为80.00 %, 明显高于正常肾组织中的表达率(53.85 %，P＜0.05）。　结论　Fas/APO-1与bcl-2基因共同参与了肾癌的发生和发展。 　　【关键词】　肾肿瘤　　癌基因蛋白质类　　基因表达 Expression and significance of Fas/APO-1 and bcl-2 protein in renal cell carcinoma Li Hongjun, Yu Lizhang, Yang Baolong,et al.Institute of Urology, First Teaching Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100034. 　　【Abstract】　Objective　To investigate the role of Fas/APO-1 and bcl-2 in occurrence and progression of renal cell carcinoma.　Method　Immunohistochemisty method was used to detect the expression of Fas/APO-1 and bcl-2 protein in 35 cases of renal cell carcinoma tissues and 26 cases of normal renal tissues.　Result　The expression rate of Fas/APO-1 protein in renal cell carcinoma tissues was 57.14 %, significantly lower than that in normal renal tissues (84.62 %) (P＜0.05), and the intensity of expression was also lower. The expression rate of bcl-2 protein reached 80.00 %, much higher than that in normal renal tissues(53.85 %)(P＜0.05).　Conclusion　Both Fas/APO-1 and bcl-2 take part in the occurrence and progerssion of renal cell carcinoma. 　　【Key words】　Kidney neoplasms　　Oncogene proteins　　Gene expression 　　 Fas/APO-1基因是凋亡信号基因，其基因产物Fas/APO-1蛋白是一种细胞凋亡信号受体［1］。Fas/APO-1和 bcl-2 是作用相反的凋亡相关基因，已有研究表明两者间的动态平衡对细胞凋亡起重要的调节作用。我们采用免疫组织化学方法对35例肾癌和26例远离癌组织的癌旁正常肾组织中凋亡相关基因 Fas/APO-1和bcl-2 蛋白进行检测，以探讨其在肾癌发生和发展中的作用。 资料与方法 　　1．标本来源：35例肾癌组织标本来自本所1993～1997年间手术的肾癌患者；男23例，女12例；年龄33～78岁，平均年龄54岁。26例正常肾组织为远离肾癌的正常肾组织。上述标本离体后用10 %福尔马林固定48小时，石蜡包埋，4 &mu;m切片，用于免疫组织化学染色。 　　2．方法： 检测Fas/APO-1蛋白表达所用的一抗为亲和纯化的兔抗人Fas/APO-1多克隆抗体，能与人源性Fas/APO-1分子C末端的第316至335个氨基酸特异性结合；Fas抗体（C-20）（购自美国Santa Cruz Biotechnology 公司)。检测bcl-2蛋白表达所用的一抗为鼠抗人bcl-2单克隆抗体bcl-2(100)（购自美国Santa Cruz Biotechnology 公司)。 　　所有标本均在同一条件下采用链菌素亲生物素蛋白-过氧化酶连接法（LSAB），参照试剂盒说明书上步骤进行免疫组织化学染色，一抗稀释度为1∶50。各步骤间均用磷酸盐缓冲液(PBS)洗片,Fas/APO-1阳性对照选用经病理确诊为淋巴瘤的病理石腊切片,bcl-2蛋白阳性对照选自bcl-2蛋白高表达的肾癌标本，用PBS代替一抗为阴性对照。 　　3．结果判定：Fas/APO-1蛋白表达以细胞膜出现棕黄色染色为阳性细胞，bcl-2蛋白表达以细胞浆出现棕黄色颗粒为染色阳性细胞，切片内染色阳性细胞率小于20 %为阴性显色，大于20 %为阳性显色。阳性显色者按细胞着色强度和范 围分为＋、?、?3个级别。将26例肾癌组织和癌旁正常肾组织配对资料对比分析，观察Fas/APO-1蛋白表达强度，并进行统计学分析。 　　4．统计学分析：对本组资料采用卡方检验。 结果 　　1．肾癌和正常肾组织Fas/APO-1蛋白表达结果：统计学分析两组间Fas/APO-1蛋白表达阳性率差异有显著性意义（P＜0.05）（表1）。Fas/APO-1蛋白表达强度的差异也有显著性意义。按表达强度将26例肾癌与癌旁正常组织配对标本分为肾癌表达低于正常肾组织组和高于正常肾组织组，两组结果显示，肾癌高表达组4例(15.38%)，表达强度一致组5例(19.23%)，正常肾高表达组17例(65.38%)；两组间差异有显著性意义（P＜0.01）。正常肾组织Fas/APO-1蛋白的表达部位以近曲小管最强，为较深棕黄色；集合管次之，为浅棕黄色；而髓袢及肾小球均无表达。 表1　肾癌和正常肾组织Fas/APO-1蛋白表达结果 分　组 例数 阳性例数 % 表达强度 － ＋ ++ +++ 肾癌组 35 20 57.14* 15 17 3 0 正常肾组织组 26 22 84.62 4 6 14 2 注：* 与正常组相比，表达阳性百分率差异有显著性意义（P＜0.05) 　　2．35例肾癌中Fas/APO-1 蛋白阳性表达结果与肿瘤病理分类、分级及分期之间的关系（表2，3）：随着肾癌分级的增加，Fas/APO-1蛋白阳性表达率及表达强度均减弱，但统计学分析差异无显著性意义；Fas/APO-1蛋白表达在临床分期间的分布无明显趋势，差异也无显著性意义。 表2　Fas/APO-1蛋白表达在肾癌病理类型之间的分布情况 组　别 例数 阳性例数 % 表达强度 － ＋ ++ +++ 透明细胞癌组 22 11 50.00 11 9 2 0 颗粒细胞癌组 4 3 75.00 1 3 0 0 肉瘤型组　　 1 0 0.00 1 0 0 0 混合型组　　 8 6 75.00 2 5 1 0 表3　Fas/APO-1蛋白表达与肾癌病理分级之间的关系 组　别 例数 阳性例数 % 表 达 强 度 － ＋ ++ +++ G1组 10 7 70.00 3 6 1 0 G2组 19 11 57.89 8 9 2 0 G3组 6 2 33.33 4 2 0 0 　　3．肾癌和正常肾组织bcl-2蛋白表达结果：统计学分析两组间差异有显著性意义（P＜0.05）(表4)。bcl-2 蛋白在肾癌不同病理分类、分级和分期间差别无统计学意义。     更多相关文档请点击>>基因表达(7)肾肿瘤(2)癌基因蛋白质类(1)