125I标记抗胃癌单克隆抗体3H11在胃癌放射免疫导向手术中的应用

王川　王怡　苏向前　林保和　许小宝　张梅颖　李吉友　徐光炜 　　【摘要】　目的　探讨125I标记抗胃癌单克隆抗体MAb 3H11在胃癌放射免疫导向手术(RIGS)中的应用价值。　方法　胃癌患者35例，在胃镜直视下将125I 标记的MAb 3H11注射于癌周围粘膜下，4～11 d后手术；术中使用手持式γ探测仪对靶部位(T)及对照本底(NT)进行放射性计数， T／NT比值≥3.5为判别胃癌及癌浸润胃壁的标准，T／NT≥3.0为判定转移淋巴结的标准；对RIGS阳性、而术后常规病理检查阴性的19组淋巴结，采用免疫组织化学方法检测微转移癌。　结果　本组病例中,33例RIGS获得成功，RIGS判别切缘癌浸润的总特异性和准确率分别为98.5%和97.0%；注射标记抗体后6～8 d手术的患者（n＝25），RIGS判别区域淋巴结转移的敏感度、特异性及准确率分别为83.6%、95.0%和91.3%；免疫组织化学染色从10组（52.6%）RIGS阳性；而术后常规病理检查阴性的淋巴结中检出胃癌微转移灶。　结论　应用125I标记抗胃癌单克隆抗体MAb 3H11进行胃癌RIGS，可有效判别胃癌浸润范围及区域淋巴结转移程度。 　　【关键词】　胃肿瘤;　抗体,单克隆;　碘放射性同位素;　放射免疫检测;　监测，手术中 Iodine-125 labeled monoclonal antibody 3H11: in radioimmunoguided surgery for primary gastric cancer WANG Chuan　WANG Yi　SU Xiangqian　et al （Department of Surgery，Clinic Neoplasms College, Beijing Medical University，Beijing 100036, China） 　　【Abstract】　Objective　To evaluate the clinical usefulness of iodine-125 labeled monoclonal antibody (MAb) 3H11 in radioimmunoguided surgery (RIGS) for patients with gastric cancer.　Methods　Thirty-five patients with primary gastric cancer were enrolled. Via endoscopy, iodine-125 labeled MAb 3H11 was injected into submucosa around the tumor. All patients underwent surgery 4 to 11 days after administration. Intraoperative radioimmunodetection was performed using a hand-held gamma-detecting probe. The counts of target sites were obtained, and tumor-to-normal tissue (T/NT) ratios were calculated. The T/NT ratio of 3.5∶1 was taken as the lowest threshold value of positive gastric wall infiltration, and 3.0:1 for lymph node metastasis. Serial sections of those RIGS-positive lymph nodes， which were originally diagnosed as negative by routine histology, were made. Immunohistochemical staining was performed to detect the existence of lymphatic micrometastasis.　Results　Of thirty-five patients, 33 underwent RIGS successfully. The accuracy rate in detecting tumor infiltration of the incision margins was 97.0%, and the specificity 98.5%. In the group of patients with an interval of 6 to 8 days between injection and operation (n=25), the RIGS results were satisfying. For the detection of lymphatic metastasis, the sensitivity of RIGS was 83.6%, the specificity 95.0%, and the accuracy 91.3%.The existences of lymphatic micrometastasis were verified immunohistochemically in 52.6% (10/19) of those RIGS positive but histologically negative lymph nodes.　Conclusion　This study validates the use of iodine-125 labeled monoclonal antibody 3H11 for the intraoperative detection of carcinomatous lesions in gastric cancer. 　　【Key words】　Stomach neoplasms；　Antibodies, monoclonal；　Iodine radioisotopes；　Radioimmunodetection；　Monitoring, intraoperative 　　胃癌是我国最常见的恶性肿瘤，目前其治疗效果尚不理想。术中如能明确癌浸润及淋巴结转移范围，将有助于实施“A”级手术，以提高疗效。我们应用125I标记抗人胃癌单克隆抗体（monoclonal antibody，MAb） 3H11进行胃癌放射免疫导向手术（radioimmunoguided surgery，RIGS）的研究，取得较理想的结果，报告如下。 资料与方法 　　1．抗体及标记：抗胃癌MAb 3H11为我院生化室制备［1］，其亚类为IgG2bκ；采用Iodogen法以125I（中国原子能科学研究院）标记，125I标记率88%～94%，纸层析法测定标记物放射化学纯度为（97.54±1.09）%，放射性比活度约37 kBq／μg蛋白。标记在无菌条件下进行，标记抗体使用前过0.22 μm除菌滤膜（Pall Gelman Laboratory, USA），产品经有关部门检测无菌、无热原。 　　2．手持式γ探测仪：AC-1型手持式γ探测仪为中国原子能科学研究院与我院联合研制；γ探头（gamma-detecting probe，GDP）的主要参数：窗宽0.4，阈值0.85，125I探测效率3%，分辨距离≤10 mm，对125I标记的胃癌细胞株BGC 823检测灵敏度约2.5×105细胞。 　　3．胃癌放射免疫导向手术（RIGS）的实施：本组35例胃癌为我院外科手术患者，均经胃镜活检病理确诊。男25例，女10例；年龄28～75岁，平均（56.3±13.5）岁；肿瘤位于胃上部4例，胃中部10例，胃下部21例；TNMⅠ期8例、Ⅱ期5例、Ⅲ期12例、Ⅳ期10例。 　　拟行RIGS的患者以100 μg MAb 3H11皮试，皮试阴性者入组。注射标记抗体前3 d开始口服Lugol′s液，每日3次，10滴/次，持续至手术前1 d以封闭甲状腺对125I的摄取。标记抗体125I- MAb 3H11（7.4×109 Bq／0.2 mg蛋白～18.5×109 Bq／0.5 mg蛋白）与40～50 mg人丙种球蛋白混匀，总体积约2.5 ml，胃镜直视下通过MB-254注射针（Olympus，日本）于瘤体周缘多点注入胃粘膜下。患者给药后4～11 d接受手术，术中剖腹后以GDP对胃癌原发灶、距肿瘤边缘2、4、6 cm处胃壁、手术切缘、胃周各组淋巴结及肝、脾等靶部位（T）进行放射性计数，每个部位检测3次，每次10 s，取均值；以正常大网膜或远离肿瘤边缘8 cm以上的正常胃壁为对照本底（NT），计算T／NT比值；所有标本进行病理组织学检查；若1组淋巴结中病理检查证实有1个转移，则该组判定为阳性。术后自胃癌原发灶取样、称重，行放射性检测，估算手术标本中放射性残留量。 　　研究初始阶段的15例病例，根据注射标记抗体至手术日的间隔时间分组：A组，间隔时间≤5 d；B组，间隔时间6～8 d；C组，间隔时间≥9 d。分析RIGS结果，确定最佳间隔时间；其后的研究按最佳间隔时间进行。 　　4．胃癌淋巴结微转移的检测：对本组病例19组术中放射性检测阳性、而术后常规病理检查阴性的淋巴结（N1 8组、N2 11组），重新制作连续切片，行HE染色及免疫组织化学染色。抗上皮膜抗原（epithelial membrane antigen，EMA）单克隆抗体工作液、广谱抗细胞角蛋白（cytokeratin，CK）单克隆抗体AE1／AE3工作液、S-P免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。 　　5．统计分析：本组资料采用秩和检验、χ2检验及四格表精确概率法分析组间差异。 结果 　　1．本组病例行RIGS成功者33例，共检测33个肿瘤原发灶、66个切缘、260组淋巴结，各靶部位T／NT值见表1。 表1　各靶部位摄取125I-MAb 3H11的T／NT值 靶 部 位 样本数 T／NT（±s） 胃癌（例） 33 76.10±109.57 正 常 切 缘（个） 65 1.35±1.05 癌浸润切缘（个） 1 2.96 肝（例） 33 3.34±3.26 脾（例） 33 3.35±1.86 非转移淋巴结（组） 168 1.51±0.70 转移淋巴结（组） 92 8.76±10.25 　　分别以正常切缘、非转移淋巴结的T／NT均值加2个标准差设定：T／NT≥ 3.5为判别胃癌及癌浸润胃壁的标准，T／NT ≥3.0为判定转移淋巴结的标准。GDP探测肿瘤原发灶的中位T／NT为22.7，判别切缘癌浸润的总特异性为98.5%（64／65），准确率97.0%（64／66）。 　　2．注射标记抗体至手术间隔时间对RIGS结果的影响见表2。转移淋巴结的T／NT比值、区域淋巴结RIGS的敏感度及准确率均以B组为最高（P＜0.05）。 表2　注射125I- MAb 3H11至手术间隔时间对各部位RIGS探测结果的影响 组　别 例数 T/NT(±s) 区域淋巴结RIGS结果 肿瘤 肝 脾 转移淋巴结 敏感度（%） 特异性（%） 准确率（%） A组 4 25.85±25.83 5.68±8.29 5.35±5.16 6.88±8.30** 45.5* 100.0 75.0 B组 7 46.67±72.68 3.69±3.26 3.63±2.15 26.52±57.12 80.8 96.8 89.5 C组 4 36.55±51.19 2.30±0.63 1.90±0.85 4.31±5.36*** 35.7** 87.5 63.3*** 　　　注：与B组比较，*P=0.051；**P＜0.05；***P＜0.01 　　3．给药至手术日间隔时间6～8 d病例共25例（含上述B组病例7例），RIGS结果见表3。 表3　注射125I-MAb 3H11至手术日间隔 6～8 d病例RIGS结果（%） RIGS部位 敏感度 特异性 准确率 切缘（50个） … 98.0（49／50） 98.0（49／50） 淋巴结（206组） 83.6（56／67） 95.0（132／139） 91.3（188／206） N1（105组） 87.0（40／46） 98.3（58／59） 93.3（98／105） N2（101组） 76.2（16／21） 92.5（74／80） 89.1（90／101） 　　4．本组病例中19组术中RID阳性，但术后常规病理检验阴性的淋巴结，经连续切片，HE和免疫组织化学染色后，从10组（13个）淋巴结中检出胃癌微转移灶，其中N1 6组（9个）、N2 4组（4个）。癌细胞多同时表达EMA和CK，仅1例印戒细胞癌为CK弱阳性而EMA阴性。 　　5．RIGS的安全性：所有患者胃粘膜下注射标记抗体后生命体征平稳，无过敏反应或腹痛、进食困难、尿痛、血尿等症状。给药后每日以γ探测仪检测甲状腺区均未检出增高信号。术中及术后GDP探测手术器械、敷料等未检出高信号。 　　每克肿瘤组织对标记抗体摄取量可达注射剂量的（0.215±0.117）%；假设手术时标本中125I 残留量以1.85×109 Bq计，操作过程时间2 h，标本距离操作者20 cm，则手术期间术者接受γ照射剂量当量为1.63×10-4 mSv［2］。 讨论 　　我们曾报道成功地应用131I标记MAb 3H11进行胃癌RIGS［3］，但由于131I的半衰期短、γ射线能量较高并伴有β射线发射，保存和防护均较为困难，限制了131I- MAb 3H11 RIGS的临床推广应用。目前改用125I标记MAb 3H11，提高了胃癌RIGS临床应用的方便性和安全性。 　　迄今，RIGS在胃癌中的报道较少［3-5］，主要应用于结、直肠癌的研究［5-8］。RIGS提高了淋巴结或其它部位微小转移癌的检出率［6，7］，使手术者术中能更准确地判定病期，从而决定更为合理的治疗方案［7，8］，并因此改善患者预后［8］。本研究结果显示，125I-MAb 3H11 RIGS判别胃癌切缘浸润的总特异性和准确率分别为98.5%和97.0%，判别胃周区域淋巴结转移的敏感度、特异性及准确率分别为83.6%、95.0%和91.3%，尤其在部分病例中检出了探查及常规病理检查未发现的淋巴结微小转移癌，显示出RIGS在帮助手术者术中即时判断肿瘤浸润和区域淋巴结转移范围、制定个体化手术方案方面的优越性。 　　对于注射标记抗体后手术时机的掌握，本研究初始阶段在给药后4～11 d进行手术，GDP判定胃周区域淋巴结转移总的敏感度、特异性及准确率分别为60.8%、95.0%和79.3%，但按给药至手术日间隔期分组统计后发现，间隔6～8 d的患者RIGS结果较为理想。此结果符合药代动力学规律：如间隔期短，肝、脾等脏器的高本底干扰了对区域淋巴结转移的探测；而间隔期过长，由于标记抗体脱碘、代谢、排出，淋巴结转移癌（尤其是微小转移癌）的放射信号弱，探测困难。本研究的结果显示胃癌周围粘膜下注射125I-MAb 3H11后6～8 d为手术最佳间隔期。 　　综上所述，使用125I标记抗胃癌单克隆抗体3H11进行胃癌RIGS，安全性高，可有效判别肿瘤浸润胃壁的范围和区域淋巴结受累程度，对于帮助手术者制定合理的个体化手术方案、提高胃癌根治术的治愈率具有实用价值。 基金项目：国家“九五”攻关基金资助（969060116） 　　作者单位：王怡（北京医科大学临床肿瘤学院外科　100036）　     更多相关文档请点击>>手术中(2)监测(418)碘放射性同位素(1)放射免疫检测(1)抗体(491)单克隆(14)胃肿瘤(7)