硝酸纤维素膜为HBsAg载体消毒试验法的研究

王雅贤　陈清　王红　俞守义　何海棠 　　提要　以4种消毒剂进行对硝酸纤维素膜上HBsAg消毒的研究。结果，对该膜上HBsAg的破坏效果，与悬液中HBsAg者一致。0.5％过氧乙酸、0.5％碘伏或2.0％碱性戊二醛作用60 min，均可将效价&le;1∶4000的HBsAg破坏，0.1％苯扎溴铵则不能。以硝酸纤维素膜作HBsAg载体，用免疫酶斑点法检测，结果直观，方法简便、易行，因HBsAg吸附牢固，可用冲洗法去除残留消毒剂。 　　关键词　消毒试验　　乙型肝炎表面抗原　　表面消毒　　硝酸纤维素膜　　过氧乙酸　　碘伏　　戊二醛 STUDY ON METHOD OF DISINFECTION TEST USING CELLULOSE NITRATE MEMBRANE AS CARRIER OF HBsAg Wang Yaxian　Chen Qing　Wang Hong　Yu Shouyi （Department of Epidemiology, the First Military Medical University,Guangzhou 510515） He Haitang （Department of Infectious Diseases, Affiliated Nanfang Hospital of the First Military Medical University） Abstract　Study on disinfection of HBsAg on cellulose nitrate membrane with four kinds of disinfectants was carried out. The results indicated that the efficacy of destruction of HBsAg on this membrane was same as that in suspension. 0.5% peracetic acid, 0.5% iodophor or 2.0% alkaline glutaraldehyde solution with a 60 minute contact time could destroy HBsAg at a titer &le;1∶400, while 0.1% benzalkonium bromide solution could not. When cellulose nitrate membrane was used as the carrier of HBsAg, examination with immunoenzyme spot method could give directly visible result. The method is simple and easy to be carried out. Because HBsAg is adsorbed firmly, the residual disinfectant can be removed by rinse. Key words　disinfection test　HBsAg　surface disinfection　cellulose nitrate membrane　peracetic acid　　iodophor　　glutaraldehyde 　　近年来，有用聚苯乙烯珠为染乙型肝炎表面抗原（HBsAg）载体评价消毒剂对其破坏效果者〔1〕。因该法存在同位素污染问题，我们采用硝酸纤维素膜作为HBsAg载体，进行了试验观察。现报告结果如下。 　　 　　1 方法 　　1.1 染HBsAg片的制备 　　所用HBsAg阳性血清（HBsAg、抗-HBc和HBeAg均为阳性）采自南方医院传染科HBsAg阳性患者，经用ELISA法检测效价为1∶8000。厚度0.45 &mu;m硝酸纤维素膜系北京化工学校工厂产。制备时，将1.0 cm×0.3 cm硝酸纤维素膜片漂浮于0.2 mol/L磷酸盐缓冲液液面上，取生理盐水稀释的不同浓度HBsAg阳性血清点染于膜上（10 &mu;l/点）。待其被膜吸附后，取出膜，放在滤纸上吸干余液，保存于4℃冰箱备用。 　　1.2 消毒试验 　　将HBsAg片置平皿内消毒液中。作用至预定时间，取出2片。1片放入相应的中和剂中，中和作用30 min，再用含0.1％吐温20、1.0％奶粉生理盐水洗；另1片不经中和剂中和，直接用生理盐水洗后浸入含10％小牛血清生理盐水中15 min，再用上述含吐温、奶粉洗液洗3次。然后，均置含2.0％奶粉生理盐水（封膜液）中10 min，再用含0.1％吐温20生理盐水洗3次，每次5 min。为了解膜片上HBsAg会否因浸泡、冲洗脱落，从而产生假阴性结果，我们设置了消毒后用中和剂中和、洗液冲洗而不经封膜液封闭的对照组。阳性对照为用消毒剂加等量中和剂作用30 min后的溶液代替消毒液，浸泡HBsAg片。采用免疫酶斑点法〔2〕检测HBsAg。先将上述处理过的膜片浸入抗HBsIgG-HRP结合物中，于37℃作用60 min，再用含0.1％吐温20生理盐水洗5次后，置显色液中显色10～20 min。结果的判断，以膜上有斑点显色为HBsAg阳性。 　　悬液试验为将消毒液与HBsAg阳性血清按4∶1混匀。作用至预定时间，加中和剂中和作用30 min，用ELISA法检测HBsAg抗原性〔2〕。 　　 　　2 结果 　　试验表明，4种消毒剂的载体法与悬液法试验结果均一致，0.5％过氧乙酸、0.5％碘伏、2.0％碱性戊二醛作用60 min，均可将效价&le;1∶4000的HBsAg破坏，0.1％苯扎溴铵（新洁尔灭）则不能（附表）。用中和剂中和与否，检测结果一致。对不经封膜液封闭组的检测表明，蛋白在洗涤过程中不会脱落。 　　 　　3 讨论 　　以硝酸纤维素膜作HBsAg载体，可直接浸于消毒液中作用一定时间，用免疫酶斑点法进行免疫测定。消毒剂将HBsAg抗原性破坏时，膜上无斑点显色，否则斑点崐显色明显。因此，结果直观。此外，试验证实该膜上HBsAg不会因浸泡、洗涤而脱落，可用冲洗法去除残留消毒剂，故适用于无合适中和剂的消毒剂。本方法简单、易行，如能制成诊断试剂盒，不仅专业人员，非专业人员也能很快掌握。 附表 载体法与悬液法HBsAg消毒试验结果的比较 作用时间(min) HBsAg效价 0.5%过氧乙酸 0.5%碘伏 2.0%碱性戊二醛 0.1%苯扎溴铵 载体法 悬液法 载体法 悬液法 载体法 悬液法 载体法 悬液法 15 1：4000 + + + + + + + + 1：2000 + + + + + + + + 1：1000 + + + + + + + + 1：500 + + + + + + + + << < < < < << < < << << < < << << < < << << < < << << < < << << < < < << < < << << < < << << < < << << < < << << < < << << < < < << < < << << < < << << < < << << < < << << < < << << 1：250 + + + + + + + + 1：125 - - + + + + + + << < < < < << < < << << < < << << < < << << < < << << < < << << < < < << < < << << < < << << < < << << < < << << < < << << < < < << < < << << < < << << < < << << < < << << < < << << < < <     更多相关文档请点击>>消毒(491)研究(6533)试验(780)中和(62)&lt(145)HBsAg(100)结果(1049)纤维(766)载体(104)