张忠明 冷希圣 冯洪强 马富 王冰
【摘要】 目的 研究肝硬变门静脉高压症患者肝组织组胺H1和H2受体的变化。 方法 光学放射自显影术。 结果 H2受体密度在肝硬变患者肝细胞168.4±22.6显著低于对照组511.9±37.6(P＜0.01);肝静脉238.8±40.7显著低于对照组313.0±52.4(P＜0.01);肝动脉55.6±7.1显著低于对照组175.4±26.1(P＜0.01);门静脉52.0±5.4 显著低于对照组166.4±17.7(P＜0.01);肝硬变患者H1受体密度在肝细胞、肝静脉、肝动脉和门静脉与对照组相比差异均无显著性意义(P＞0.05)。 结论 肝硬变门静脉高压症患者肝细胞及肝内各血管壁的H2受体显著降低。
【关键词】 肝硬化 受体，组胺 放射自显影术
Histamine-1 and -2 receptors in hepatic tissues of cirrhotic patients with portal hypertension Zhang Zhongming?, Leng Xisheng, Feng Hongqiang, et al.?Department of General Surgery, 252nd Hospital of People′s Liberation Army, Baoding 071000.
【Abstract】 Objective To study histamine-1 and histamine-2 receptors in hepatic tissues of cirrhotic patients with portal hypertension. Method Light autoradiography was used. Result The density of histamine-2 (H-2) receptors (cirrhotic patients/ controls) in hepatocytes was 168.4±22.6/511.9±37.6(P＜0.01), in hepatic vein 238.8±40.7/313.0±52.4 (P＜0.01),in hepatic artery 55.6±7.1/175.4±26.1(P＜0.01), and in portal vein 52.0±5.4/166.4±17.7(P＜0.01)．The density of histamine-1 receptors in hepatocytes, hepatic vein, hepatic artery and portal vein was not statistically changed between cirrhotic patients and controls (P＞0.05). Conclusion The density of H-2 receptors in hepatic tissues of cirrhotic patients decreased significantly.
【Key words】 Liver cirrhosis Receptors, histamine Autoradiography
为进一步了解肝硬变门静脉高压症患者肝组织结构上组胺H1和H2受体的分布及变化,我们应用氚(3H)标记的吡拉明和甲氰咪胍分别作为组胺H1和H2受体的放射配基,对肝硬变门静脉高压症患者和对照组患者用光学放射自显影方法进行了研究,现报告如下。
资料与方法
一、主要试剂与器材
H1受体配基3H-吡拉明(22 Ci/mmol);H2受体配基3H-甲氰咪胍(25 Ci/mmol)；H1受体拮抗剂扑尔敏；H2受体拮抗剂甲氰咪胍；核4液体乳胶；液闪计数器(Wallac-1410型)；恒冷箱切片机；恒温恒湿乳胶涂布箱。
二、标本收集与自显影片的制备
肝标本取自1993年10～12月间住院患者。对照组为8例无肝病及高血压患者,男女各4例,38～59岁,平均50.3岁。乙型肝炎后肝硬变患者8例,男6例,女2例,45～63岁,平均53.8岁,HBsAg全部阳性,入院前1～12个月均有呕血、黑便等消化道出血病史,X线钡餐均有中重度胃底食管静脉曲张,术中经胃网膜静脉穿刺测得门静脉压为2.84～3.53 kPa(1 kPa=10.2 cmH2O),平均3.28±0.31 kPa。术中取小块肝组织,立即放入干冰-乙醇预冷的已烷中速冻约10秒钟,移入恒冷箱切片机(刀温-19℃),连续切片,片厚6μm,裱贴于涂有1％明胶的洁净玻片上,冷风吹干,置-20℃冰箱备用。
选用结构大小一致的非肝病肝组织切片进行预实验,用液闪计数器测量,选择了适当的温育条件(表1)。自显影片的制备按我们以前的方法进行［1］。
表1 组织标本温育条件
温 育 条 件 组胺H1受体 组胺H2受体
放射配基 ３H-吡拉明 ３H-甲氰咪胍
配基浓度(nmol/L) 40 80
温育时间(min) 45 35
温育温度(℃) 25 0
洗涤时间(min) 2×2 2×2
竞争剂浓度(μmol/L) 40 80
结果
用显微镜目镜(20×100)网格计数法计数银粒。以每1000μm2组织结构所含银粒数(±s)表示受体密度,非竞争片与竞争片同一结构的计数之差为特异性结合。结果见表2、表3。
表2 肝硬变组和对照组肝组织结构上H1受体密度*
组织标本 肝硬变组 对照组 P值
肝细胞 63.1±5.5 68.7±8.7 ＞0.05
肝静脉 34.7±5.0 35.6±8.2 ＞0.05
肝动脉 35.5±4.7 40.6±7.5 ＞0.05
门静脉 34.4±6.8 38.8±5.2 ＞0.05
注：*曝光13天,每1000μm2组织结构所含银粒数(±s)
表3 肝硬变组和对照组肝组织结构上H2受体密度*
组织标本 肝硬变组 对照组 P值
肝细胞 168.4±22.6 511.9±37.6 ＜0.01
肝静脉 238.8±40.7 313.0±52.4 ＜0.01
肝动脉 55.6±7.1 175.4±26.1 ＜0.01
门静脉 52.0±5.4 166.4±17.7 ＜0.01
注：*曝光6天,每1000 μm2组织结构所含银粒数(±s)
方差分析提示：H1受体密度,对照组及肝硬变组肝细胞上的银粒密度显著高于各血管壁(P＜0.05),2组同一结构上的银粒密度差异无显著意义。H2受体密度,对照组显示肝细胞上的银粒显著高于肝静脉,肝静脉显著高于肝动脉和门静脉(P＜0.01),肝动脉和门静脉间差异无显著意义(P＞0.05)。肝硬变组肝静脉上的银粒显著高于肝细胞及肝动脉和门静脉(P＜0.01),肝动脉门静脉间差异无显著意义(P＞0.05),肝硬变组各结构上的受体密度显著低于对照组的同一结构(P＜0.01)。
讨论
用放射自显影方法已证实大鼠肝细胞及各血管壁上存在H1和H2受体,且以肝细胞上H1受体为主,H2受体在各血管壁上呈均匀分布［1］。本研究结果显示肝细胞及各血管壁上存在的H1和H2受体以H2受体占优势,H1受体在各血管壁上呈均匀分布。这两种结果的不同,说明存在着种属差异,两种受体在介导生理功能方面所发挥的主次作用不同。
肝细胞上存在的H1和H2受体,与其参与的复杂功能有关,除介导糖原分解、糖原异生和尿素生成外,在组胺的灭活上可能也发挥着重要作用。大量研究结果表明,肝脏是灭活组胺的主要场所。在肝硬变时,血中组胺水平显著增高［2］,这可能与本研究发现肝硬变组肝细胞上H1和H2受体减少,尤其是H2受体显著减少有关。乙型肝炎病毒感染,引起肝细胞急性坏死、炎症反应和纤维组织增生,可导致细胞膜受体减少,组胺与受体的结合随之减少,肝脏对组胺的灭活能力下降,而表现为肝硬变患者血中组胺水平显著增高。我们在计数银粒时发现,小结节肝细胞上的H2受体减少更明显,这可能与新生的肝细胞生理功能低于成熟的肝细胞有关。
组胺对肝血流动力学的影响早为学者们所重视，认为组胺引起门静脉压力增高，阻力增加的部位在窦后,即肝小静脉收缩。由于H2受体拮抗剂甲氰咪胍能降低肝硬变患者的门静脉压力［3］,组胺引起肝血流动力学的改变是通过组胺受体介导的。本研究结果显示,肝血管壁上存在H1和H2受体,且以肝静脉壁上的H2受体占优势，H1受体在各血管壁上呈均匀分布。从受体在血管壁上的这种分布特点分析,组胺引起门静脉压力增高可能是以肝静脉壁上的H2受体介导的缩血管效应为主。
本研究结果显示,肝硬变组血管壁上的H2受体较对照组显著的下降,H1受体无明显变化,说明在肝血管壁上是以H2受体介导的作用为主。肝血管壁上H2受体的减少可能是受体发生“下行调节”的结果［4］。当肝硬变患者血中组胺水平升高时,组胺与血管壁上的组胺受体结合增加,导致门静脉压力升高。机体为了维持内环境的稳定,就会反馈性的通过“受体内移”等机制,使受体逐渐发生了“下行调节”,表现为肝硬变患者肝血管壁上的受体减少。
参考文献
1张忠明,冷希圣,冯洪强,等. 肝硬变形成过程中大鼠肝组织结构上H1、H2受体的放射自显影研究. 中华实验外科杂志,1997,14:4-5.
2李书隽,王新慧,韩建德,等. 肝硬变门静脉高压症患者周围血及门静脉血中几种液递物质的观察.中华外科杂志,1988,26:44-48.
3李澍,侯海岩,冷希圣,等.甲氰咪胍对门静脉高压症肝血流状态影响的声象观察. 中华外科杂志,1995,33:466-469.
4吕宝璋,田英，主编.受体学概论.北京:科学出版社,1991.73-78.
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