四种理化因子对脊髓灰质炎病毒感染性与标志物破坏结果的比较

张文清　姜绍谆*　马文煜*　骆文静　张进 　　提要　分别以热力、紫外线、次氯酸钠、碘对脊髓灰质炎病毒1型作用后，检测感染性、抗原性与核酸。经热力或碘作用后，病毒感染性消失与抗原性破坏较一致，而核酸破坏明显滞后；经氯或紫外线作用后，病毒感染性消失与核酸破坏较一致，而抗原性破坏不明显。 　　关键词　病毒灭活检测法　脊髓灰质炎病毒　抗原　核酸　热力　紫外线　次氯酸钠碘 COMPARISON OF DESTRUCTIVE EFFECTS OF FOUR PHYSICALC AND CHEMICAL AGENTS ON INFECTIVITYC AND MARKER OF POLIOMYELITIS VIRUS Zhang Wenqing　Jiang Shaochun*　Ma Wngyu*　Luo Wenjing　Zhang Jin (Department of Army Hygiene, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032) Abstract　After exposure of poliomyelitis virus type 1 (PV Ⅰ) to heat, ultraviolet rays, sodium hypochlorite and iodine, its infectivity was observed using plaque counting method, its antigenicity was examined with Western blot test and its nucleic acid was examined with PCR. The results indicated that the infectivity of the virus disappeared after exposure to 60～100℃ heat or 2～16mg/L available iodine for 5～60min. This conformed with destruction of antigenicity, while destruction of nucleic acid significantly delayed. After exposure to ultraviolet irradiation at intensity of 768～4620 μW/cm2 or 0.2～0.5mg/L availabel chlorine of sodium hypochlorite solution for 5～60min, the infectivity of the virus disappeared in conformity with destruction of nucleic acid, while destruction of the antigenicity was not significant. Key words　method of examining virus inactivation　poliomyelitis virus　antigennucleic acid　heat　ultraviolet rays　sodium hypochlorite　iodine 　　脊髓灰质炎病毒多出现于环境水体中。为了解在水消毒研究中各种检测方法对评定该病毒灭活效果的意义，于实验室内进行了对比试验。对比的检测方法有以下3种：① 以免疫印迹试验（DIBA）检测该病毒抗原的抗原性；②用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测核酸；③据噬斑计数法(PFUA）判断病毒的感染性。所用杀菌因子有：热力、紫外线、碱性次氯酸钠溶液、碘溶液。现将结果报告于下。 　　1 方法 　　1.1病毒水样的制备 　　将脊髓灰质炎病毒 1 型(PV1） 经PEG6000沉淀、差速离心纯化后，作抗菌处理，再用无菌三蒸去离子水稀释至含量为 105　TCID50/ml 的悬液，作为病毒水样。 　　1.2消毒处理 　　1.2.1 热力　取1.0ml病毒水样，置离心管中，滴加50μl液体石蜡以防水份蒸发。用PCR扩增仪恒温加热至预定温度后计时。作用至预定时间，立即移至冰浴中。放置5min, 进行噬斑计数〔1〕、ORT-PCR〔2〕与DIBA〔3〕等检测。同时，设不加热对照管（置-4℃下）。 　　1.2.2 紫外线　取约0.6ml病毒水样，滴加至6孔聚乙烯培养板（直径4cm）中，使之形成一薄层。于37℃干燥后，分别置超净工作台中紫外线灯下30、20、10cm处（紫外线辐照度值分别为786、2030、4620μW/cm2）照射至预定时间（对照置相同室温下不经紫外线照射）。然后，加约0.5ml水混匀，进行上述各项检测。 　　1.2.3 消毒剂　将碱性次氯酸钠溶液（安替佛民，Antiformin）用磷酸盐缓冲液（pH 7.4）稀释，将固体碘用10%碘化钾溶液溶解并稀释至预定浓度。取病毒水样分别与两者（对照为磷酸盐缓冲液）混匀。作用至预定时间，加中和剂（经预试验选用2%硫代硫酸钠溶液），混匀。中和作用10min，采用病毒漂浮法〔4〕将消毒剂与中和剂反应后的产物去除，再进行有关检测。 　　2 结果 　　2.1病毒漂浮法对PV 1的回收效果 　　经检测，含PV 1　4.0、5.0、6.0 TCID50/ml悬液被病毒漂浮法处理后的感染性回收率分别为89.8%、94.5%、和92.5%。 　　2.2热力对PV 1的灭活作用 　　试验表明，80℃作用30min，或95℃作用5min，可使PV 1感染性全部消失；80℃作用60 min，或100℃作用10min，才将抗原性破坏；而使其核酸破坏则需100℃作用60min（表1）。 表1 热力作用后PV 1不同指标的变化 Table 1 Changes in various indices of PV 1　after exposure to heat 作用温度 Temperature (℃) 作用不同时间(min)的结果 Results after exposure for different periods of time (min) 0 5 10 30 60 核酸 Nucleic acid 60 + + + + + 80 + + + + + 95 + + + + + 100 + + + + - 抗原性 Antigenicity 60 + + + + + 80 + + + + - 95 + + + + - 100 + + - - - 蚀斑数 Plaque count (pfu／ml) 60 760 000 610000 420000 970 17 80 760 000 760000 960000 0 0 95 760 000 0 0 0 0 100 760 000 0 0 0 0 注：“＋”表示阳性，“-”表示阴性。 Note:“＋”denotes positive, “-”denotes negative. 　　2.3 紫外线对PV 1的灭活作用 　　以辐照度值为2030μW/cm2的紫外线照射30min，可使PV 1感染性消失，核酸破坏，但以辐照度值为4620μW/cm2的紫外线照射60min仍不能将抗原性破坏（表2）。 表2　紫外线照射后PV 1不同指标的变化 Table 1 Changes in various indices of PV 1after ultraviolet irradiation_ 辐照度值 Radiationin tensity (μW／cm2) 照射不同时间(min)的结果 Results after irradiation for different periods of time (min) 0 5 10 30 60 核酸 Nucleic acid 768 + + + + + 2030 + + + - - 4620 + + + - - 抗原性 Antigenicity 768 + + + + + 2030 + + + + + 4620 + + + + + 蚀斑数 Plaque count (pfu／ml)     更多相关文档请点击>>感染(2222)病毒(1312)检测(1562)比较(831)破坏(82)标志(56)结果(1049)因子(798)作用(2694)