糖类蛋白保护剂对热力灭活冻干IgG制品中病毒的影响

许金波　刘育京　李成文　张文福　周锡鹏 　　提要　采用80℃和100℃干热灭活冻干蛋白制品中的病毒时，冻干品中的糖含量（作为蛋白保护剂）≤10%，对病毒灭活效果影响较小；糖含量≥20%，热处理后的冻干蛋白剂型变化明显。 　　关键词　干热　　病毒灭活　　糖类　　蛋白保护剂　免疫球蛋白　水泡性口炎病毒 INFLUENCE OF PROTEIN PROTECTOR SACCHARIDE ON EFFICACY OF HEAT IN INACTIVATING VIRUS IN LYOPHILIZED IgG PRODUCT Xu Jinbo　Zhou Xipeng Institute of Field Transfusion, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071 Liu Yujing　Li Chengwen　Zhang Wenfu Institute of Microbiology and Epidemiology, Academy of Military Medical Sciences Abstract 　　After lyophilization of sucrose or sorbitol at different concentrations with vesicular stomatitis virus and IgG, the influence of saccharide on inactivation of virus by heat and the external color and redissolution of lyophilized IgG after treatment were observed. The results indicated that after treatment with 80℃ and 100℃ dry heat, the saccharide content in lyophilized product was ≤10% and the influence on efficacy of inactivating virus was minimal. The lyophilized product only showed change in color. When the saccharide content was ≥20%, the property of preparation of lyophilized protein changed obviously. 　　Key words　dry heat　　inactivation of virus　　saccharide　　protein protector　　immunoglobulin　　vesicular stomatitis virus 　　据报道，用巴氏法灭活血浆蛋白制品中的残留病毒时，蛋白液中加入较高浓度的糖类保护剂可减弱热力对血浆蛋白分子生物活性的损伤作用，但灭活病毒效果受明显影响〔1,2〕。用干热法灭活冻干蛋白制品中的病毒时，冻干品中可否加入高浓度的糖类蛋白保护剂目前还鲜见报道。为此，将不同浓度的蔗糖、山梨醇及指示病毒与IgG一起冻干后，观察糖类对热力和微波灭活病毒的影响及处理后冻干IgG的外观色泽和复溶效果。 　　1　方法 　　1.1IgG冻干品的制备 　　试验病毒为水泡性口炎病毒（VSV，Indiana Serotype），滴度>8TCID50(lg)。试验时，配制含不同浓度蔗糖（北京化学试剂厂,分析纯）与山梨醇（北京化学试剂厂，分析纯）的IgG溶液。取该液0.9ml，加0.1ml病毒液，混匀（IgG含量为50mg）。经-70℃预冻后放入LGL-冷冻干燥机（军事医学科学院实验仪器厂产）内，在-42℃和50Pa真空度下干燥30h，而　后将安瓿封口。冻干品中病毒滴度单位为每50mgIgG中所含的TCID50。 　　1.2病毒灭活方法 　　1.2.1干热法　冻干IgG中的病毒采用102A型远红外线快速干燥箱(1400W,200±0.5℃，北京振兴实验仪器厂产) 处理。试验时，在干燥箱隔层中间放一温度计，以指示处理样品放置部位的实际温度。当箱中达到所试温度并稳定30min后，再放入2支试验样品。用结晶氯化铝（熔点100℃）和乙酰胺（熔点79℃）化学指示剂观察安瓿内容物到达的温度。灭活时间从安瓿内容物的温度到达所规定温度（100℃，80℃）时算起。 　　1.2.2微波法　用650W微波炉（飞龙牌，FL-650A，湖北孝感产），通过设定不同处理时间观察微波对冻干IgG中VSV的灭活效果。 　　1.3病毒灭活效果判定 　　病毒检测采用病毒感染细胞方法。用男性白人咽癌组织上皮样细胞（HEP-2，ATCC CCL23）评价VSV的感染性。HEP-2细胞（DMEM培养）经VSV攻击后在二氧化碳箱中培养（37℃，二氧化碳浓度为5%），细胞连续传3代，无病变者判为病毒灭活。 　　2　结果 　　2.1不同糖含量冻干液对VSV的影响 　　不同糖含量冻干液中的VSV经冷冻真空干燥后，再分别测定其感染滴度。结果表明，蔗糖和山梨醇2种蛋白保护剂对VSV的影响相近。当冻干液中糖含量在5%～20%时，冻干后的VSV约下降1～2个对数滴度（TCID50,lg）；当糖含量达到30%时，VSV约减少3个对数滴度（附图）。 附图　冻干液中糖含量对VSV的影响 Fig Influence of saccharide content in lyophi- lized fluid on VSV ▲———▲蔗糖 Sucrose ■———■ 山梨醇 Sorbitol 　　2.2不同糖含量保护剂对热力灭活VSV的影响 　　病毒灭活试验结果表明，冻干IgG中蔗糖或山梨醇含量在10%以下时，病毒灭活效果未受影响，经80℃2h和100℃30min处理后，病毒（6.2～8.4TCID50,lg）可全部被灭活，但冻干品外观色泽略有改变。当保护剂含量达到20%以上时，经上述2种热剂量处理后，冻干IgG形成凝块，外观色泽明显改变，不易复溶，难以评价病毒的灭活效果（表1）。 表1　冻干IgG中不同糖含量对热力灭活VSV的影响 Table 1 Influence of different saccharide contents in lyophilized IgG on inactivating VSV by heat 保护剂 Protector 含量 Content 作用温度 Tempera ture(℃) VSV滴度 VSVtiter(TCID50,lg) 完全来灭活时间 Time for complete inactivation(h) 外观及复溶 Appearance and redissolution 蔗糖 Sucrose 0 80 8.2 2.0 白，易溶 White,easily soluble 　 5 80 6.4 2.0 微黄，较易溶 Slight yellow,rlatively easily soluble 　 10 80 6.2 2.0 微黄，较易溶 Slight yellow,rlatively easily soluble 　 20 80 6.2 … 黄，难溶 Yellow,difficult to dissolve 　 30 80 5.1 … 黄，难溶 Yellow,difficult to dissolve 蔗糖 Sucrose 0 100 8.2 0.5 白，易溶 White,easily soluble 　 5 100 6.4 0.5 微黄，较易溶 Slight yellow,rlatively easily soluble 　 10 100 6.2 0.5 微黄，较易溶 Slight yellow,rlatively easily soluble 　 20 100 6.2 … 黄，难溶 Yellow,difficult to dissolve 　 30 100 5.1 … 黄，难溶     更多相关文档请点击>>影响(3274)病毒(1312)蛋白(1915)VSV(4)热力(8)o(322)IgG(71)制品(29)含量(894)保护(292)