ELISA法检测不同方法浓缩样本HBsAg结果的比较

马爱宁　黄国平 　　提要　为提高ELISA法对采样液中HBsAg的检出率，将采样液浓缩。结果，用聚丙烯酰胺凝胶法浓缩的采样液，HBsAg检出率达8.33％～9.17％，明显高于用离心沉淀法浓缩者（5.83％）及浓缩前的采样液者（2.98％～3.33％）。 　　关键词　HBsAg检测　　ELISA法　　采样液浓缩　　聚丙烯酰胺凝胶法　　离心沉淀法 COMPARISON OF RESULTS OF ELISA EXAMINATION OF HBsAg SAMPLES CONCENTRATED BY DIFFERENT METHODS Ma Aining　Huang Guoping (Yangzhou Municipal First People's Hospital, Jiangsu Province, Yangzhou 225001) Abstract In order to increase the rate of detection HBsAg in fluid sample by ELISA method, the sample was concentrated. The results showed that the detection rate of HBsAg in the sample concentrated by polyacrylamide gel method was 8.33%～9.17% which was significantly higher than that in the sample concentrated by centrifugal sedimentation method (5.83%) and in the sample before concentration (2.98%～3.33%). 　　Key words　HBsAg examination　　ELISA method　　concentration of HBsAg sample　　polyacrylamide gel method　　centrifugal sedimentation method 　　从物体表面和消毒液采样，检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）时，多数医院采用ELISA法。因该法灵敏度低于SPRIA法，并且，样本经采样液或中和剂溶液稀释，使HBsAg检出率较低。为此，对经不同方法浓缩的样本，用ELISA法检测HBsAg结果进行了比较。现将结果报道如下。 　　 　　1 方法 　　1.1 样本的采集与浓缩处理 　　物体表面用浸有采样液（去离子水或生理盐水）的棉拭涂抹采样。将采样后棉拭头剪入盛有2 ml采样液的试管中。置振荡器上振荡以洗下棉拭上HBsAg。对使用中的消毒液取1 ml，加入到含1 ml原浓度中和剂溶液或0.1 ml10倍浓度中和剂溶液的试管中，混匀。 　　用去离子水作采样液所采物体表面样本的洗涤液，以3 000 r/min离心3 min。取其上清液1 ml，再经18 000 r/min离心20 min，取沉淀物于24 h内检测。 　　取用生理盐水作采样液所采物体表面样本的洗涤液1 ml，或用原浓度中和剂溶液中和的消毒液1 ml，放入装有10粒专用于浓缩HBV样本之聚丙烯酰胺凝胶（济南市医学科学研究所提供）的试管中。作用60 min，待该凝胶粒吸附样本水分，使其浓缩约10倍后检测。 　　1.2 HBsAg的检测 　　对上述常规样本与经浓缩后样本，均用ELISA法(试剂灵敏度为1 ng/ml，华美生物工程公司产)检测HBsAg抗原性。以生理盐水(消毒液检测时以中和剂)作阴性对照，以HBsAg标准品(含HBsAg1 ng/ml，卫生部临床检验中心提供)作阳性对照。检测结果，以样本OD值（S）与阴性对照OD值（N）的比值（S/N）&ge;2.1为HBsAg阳性。 　　 　　2 结果 　　2.1 物体表面HBsAg污染 　　结果表明，样本经聚丙烯酰胺凝胶法浓缩后，检测HBsAg阳性率可高达9.17％，经离心沉淀法浓缩者为5.83％，而常规样本者仅3.33％（表1）。三者间有显著性差异（P<0.05）。 表1 不同方法浓缩处理的物体表面采样液 　　　　　　HBsAg检测结果 样　本 阳性样本份数 阳性率(%) 常规采样液 4 3.33 离心沉淀物 7 5.83 凝胶法浓缩液 11 9.17 　注: 检测各组样本份数均为120份。阳性对照S/N值为2.24。 2.2 使用中消毒液HBsAg污染 　　经比较，经聚丙烯酰胺凝胶法浓缩样本，检出HBsAg阳性率为8.33％，采用10倍浓度中和剂减少样液稀释者为5.36％，常规浓度中和剂中和的样本者仅2.98％（表2）。三者间有显著性差异（P<0.05）。 表2 不同方法浓缩处理的消毒液样本HBsAg 　　　　　　检测结果 样　本 阳性样本份数 阳性率(%) 常规采样液 5 2.98 浓中和剂减少稀释的采样液 9 5.36 凝胶法浓缩液 14 8.33 　注: 检测各组样本份数均为168份。阳性对照S/N值为2.24。 　　3 讨论 　　3.1 通常认为，0.1 ng/ml的HBsAg即有传染性〔1〕。目前，ELISA法国产试剂检测HBsAg灵敏度为1.0～3.2 ng/　ml〔2〕。为此，将采样液浓缩，以提高HBsAg的检出率，甚为必要。 　　3.2 结果表明，采用离心沉淀法浓缩的物体表面采样液，以及采用浓中和剂中和采样消毒液以减少对其稀释，均可提高ELISA法对其污染HBsAg的检出率。但用聚丙烯酰胺凝胶法浓缩后的物体表面采样液与消毒液，ELISA法对其污染HBsAg检出率明显高于上述方法，HBsAg含量仅为0.1～0.5 ng/ml的稀释液经此法浓缩后，均可检出HBsAg为阳性。 马爱宁（江苏省扬州市第一人民医院，扬州　225001） 黄国平（江苏省扬州市第一人民医院，扬州　225001） 参考文献 ［1］许斌，韩光宇，程梅. 血液HBsAg、抗HCV复检中应采用不同试剂和设置低限灰区. 临床检验杂志，1998；16(6)：342. ［2］丁兰英，蒋莉，李荣芬，等. ZWX-1型紫外线消毒器对微生物杀灭效果的试验观察. 中国消毒学杂志，1998；15(1)：11.     更多相关文档请点击>>检测(1562)方法(1894)比较(831)采样(50)样本(44)浓缩(43)HBsAg(100)结果(1049)不同(864)