张天宝 黄晓波 岳木生
提要 蜂胶复方消毒剂为将天然蜂胶提纯后溶于75％乙醇溶液而成，原液含10％蜂胶。采用载体定量杀菌试验与动物试验，分别观察了其杀菌效果与毒性。结果，其原液按1∶6加水稀释液对布片上大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作用15 min，杀灭率均为100％；按1∶2加水稀释液对布片上白色念珠菌作用20 min，杀灭率为99.96％～99.98％。杀菌效果因有机物存在或该剂存放于54℃下14 d而有所下降。其原液对小鼠口服LD50>5000 mg/kg，对家兔皮肤刺激反应积分为0，属实际无毒、无刺激物质。
关键词 中药复方消毒剂 蜂胶 杀菌作用 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 稳定性 毒性
EXPERIMENTAL OBSERVATION ON GERMICIDAL EFFICACY AND TOXICITY OF COMPOUND DISINFECTANT OF BEE GLUE
Zhang Tianbao Huang Xiaobo Yue Musheng
（Hubei Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station, Wuhan 430079）
Abstract The compound disinfectant of bee glue was prepared by dissolving the purified natural bee glue in 75% ethanol solution. Its stock solution contained 10% bee glue. The carrier quantitative germicidal test and animal test were used to observe its germicidal efficacy and toxicity respectively. The results showed that its dilute solution formed by mixing its stock solution with water at a ratio of 1∶6 with a 15 minute contact time could kill 100% of Escherichia coli and Staphylococcus aureus on cloth strip and the dilute solution formed by adding water at a ratio of 1∶2 with a 20 minute contact time could kill 99.96%～99.98% of Candida albicans on cloth strip. The germicidal efficacy decreased due to presence of organic substances or after storing at 54℃ for 14 days. The oral LD50of its stock solution in mice was >500 mg/kg and the integrated score of skin irritative reaction in rabbits was zero, therefore it belongs to actually non-toxic and non-irritative substance.
Key words compound disinfectant ofChinese drug bee glue ermicidal action Escherichia coli Staphylococcus aureus Candida albicans stability toxicity
蜂胶是工蜂（西蜂种）采集的植物树脂与其上颚腺分泌物和蜂蜡等形成并涂于蜂巢内部的具有粘性的固体胶状物质，起防霉抗菌和加固巢穴作用。其主要含55％树脂、树香，30％蜂蜡，7％～10％挥发油，5％花粉等。其中，高良姜素、松属素、乔松酮、阿魏酸、咖啡酸、肉桂酸、香草酸等化学成分具有较强的抗细菌、真菌与病毒作 用〔1〕。对其杀菌作用的实验报道很少。我们采集蜂箱中的天然蜂胶，提纯成蜂胶块，再用75％乙醇配成含10％蜂胶的复方消毒剂，对其杀菌效果与毒性进行了试验观察。现将结果报道于下。
1 方法
1.1 试验菌片的制备
用含1％蛋白胨的0.03 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS），将试验菌大肠杆菌（8099）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）与白色念珠菌（ATCC 10231）的新鲜斜面培养物洗脱，分别制成菌悬液。以其滴染10 mm×10 mm的脱脂白平纹布片，制成菌片。
1.2 中和剂选择试验
试验菌为金黄色葡萄球菌与白色念珠菌。试验分组为：① 消毒剂+菌片；② （消毒剂+菌片）+中和剂；③ 中和剂+菌片；④ （消毒剂+中和剂）+菌片；⑤ PBS+菌片（正常菌片对照）；⑥ 未加菌PBS、中和剂与培养基对照。试验结果，以第6组不长菌，第3、4、5组组间菌数相差不超过10％，第1组不长菌或菌数远少于第2组，第2组菌数超过100 cfu/片时，表明所选中和剂及其浓度适宜〔2,3〕。
1.3 载体定量杀菌试验
试验时，按每片菌片用5.0 ml消毒液，将菌片浸泡于消毒液（阳性对照为PBS）中。作用至规定时间，将菌片移入含5.0 ml中和剂溶液的试管中。中和作用10 min，振打试管80次以洗脱菌片上菌并混匀。取洗脱液作活菌计数，计算杀灭率。
观察有机物影响时，用加小牛血清的菌悬液滴染布片。
1.4 稳定性试验
取3批样品置54℃温箱中存放14 d。于放置前、后，分别取样检测对金黄色葡萄球菌的杀灭效果。
1.5 毒性试验
1.5.1 急性经口毒性试验
选体重18～22 g昆明种小白鼠50只，随机分成4个剂量组（10 000、5000、2500、1250 mg/kg）和1个对照组，每组10只（雌雄各半）。用无菌蒸馏水将该剂蜂胶含量稀释成应用浓度，按0.1 ml/10 g（体重），一次灌胃（对照组为等量无菌蒸馏水）。授药后观察14 d，记录各组动物中毒症状及死亡时间，计算LD50。
1.5.2 急性皮肤刺激试验
选体重2～3 kg大耳白兔4只，试验前24 h用脱毛剂脱去脊背两侧毛，分别暴露2.5 cm×2.5 cm皮肤。试验时，取蜂胶消毒剂原液0.5 ml，涂于一侧皮肤上，另侧皮肤作对照。作用6 h，用水冲洗掉消毒剂。于洗后1、24、48 h观察皮肤反应情况。
.5.3 急性眼刺激试验
选体重2～3 kg大耳白兔4只，试验前24 h使其开始适应实验室环境。试验时，一侧眼内滴1～2滴消毒液，另侧眼内滴无菌蒸馏水作对照。于滴药后6、24、48、72 h和4、7 d观察眼睛反应情况。
2 结果
2.1 中和剂试验结果
经试验，用含0.5％硫代硫酸钠、1.0％吐温80与0.5％卵磷脂的PBS中和蜂胶复方消毒剂原液按1∶4加水稀释液（对金黄色葡萄球菌）或按1∶2加水稀释液（对白色念珠菌），均符合所定要求（表1）。
2.2 杀菌效果
试验表明，蜂胶复方消毒剂按1∶6加水稀释液对布片上大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作用15 min，按1∶8加水稀释液作用20 min，杀灭率均为100％（表2）。其按1∶2加水稀释液对布片上白色念珠菌作用20 min，杀灭率达99.96％～99.98％。
表1 蜂胶复方消毒剂中和剂试验结果
Table 1 Results of neutralizer test for compound di-
sinfectant of bee glue
组 别Group 平均菌数Average bacterial count(cfu／片)
金黄色葡萄球菌S. aureus 白色念珠菌C. albicans
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