袁庆霞 张文福 钟儒波 刘蓉
提要 采用凝固法与生化分析法，对亚甲蓝光敏消毒法处理后人血浆中凝血因子与酶活性所受影响进行了观察。向人血浆中加入1 μmol/L亚甲蓝，以20 000 lx强度的红色光（波长为640～700 μm）照射30 min，血浆中凝血因子Ⅷ促凝活性的破坏低于20％可接受水平，活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）的延长略超过正常允许值（在照射20 min时仍未超过），血浆中谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶和天冬氨酸转氨酶的活性均无明显变化。
关键词 亚甲蓝光敏法 血浆消毒 凝血因子 谷丙转氨酶 乳酸脱氢酶 碱性磷酸酶 天冬氨酸转氨酶
INFLUENCE OF METHYLENE BLUE PHOTODYNAMIC
DISINFECTION ON COAGULATION FACTORS
AND ENZYME ACTIVITIES OF PLASMA
Yuan Qingxia Zhang Wenfu Zhong Rubo Liu Rong
(Institute of Microbiology and Epidemiology,
Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071)
Abstract
Influence of methylene blue photodynamic disinfection treatment on coagulation factors and enzyme activities of human plasma was observed using coagulation method and biochemical analysis. 1 μmol/L methylene blue was added to human plasma which was then irradiated by red light (the wavelength was 640～ 700 μm) at an intensity of 20 000 lx for 30 min. Destruction of coagulative activity of factor Ⅷ in plasma was lower than 20% acceptable level. Activated partial thromboplastin time (APTT) and prothrombin time (PT) were prolonged slightly beyond the normal allowable values (did not exceed the allowable value after irradiation for 20 min). The activities of glutamate - pyruvate transaminase (GPT), lactate dehydrogenase (LD), alkaline phosphatase (AP) and aspartic transaminase (AT) did not change significantly.
Key words methylene blue photodynamic method disinfection of plasma coagulation factor glutamate-pyruvate transaminase lactate dehydrogenase alkaline phosphatase aspartic transaminase
近年来，经亚甲蓝光敏法消毒处理的人血浆在欧洲一些国家已大量试用于临床，并取得了较好的效果。为了提高我国血液制品的病毒灭活工艺水平，我们据文献［1］报道，用亚甲蓝光敏消毒法对临床用冰冻人血浆进行消毒处理，并证实了其对病毒有良好的灭活能力［2］。现将其对整袋人血浆中各种酶活性成分的破坏情况报告如下。
1 方法
1.1 血浆消毒处理
将临床用冰冻人血浆（中国人民解放军中心血站提供）经30℃水浴融化，转至无菌国产血浆袋中，每袋198 ml。加入2 ml亚甲蓝染料（100 μmol/L，Sigma公司产），使终浓度为1 μmol/L，充分混匀10 min。于室温（20～30℃）条件下经20 000 lx产热量较低的红色光（波长为640～700 μm）照至预定时间。对消毒处理前后的血浆，分别取样测定各种酶活性的变化。
1.2 凝血因子检测
凝血因子Ⅷ促凝活性（FⅧ:C）、活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）的测定，采用凝固法进行（试剂盒由美国太平洋公司产，凝 血仪为日本东亚公司产CA6000型全自动凝血仪）。检测工作由中国人民解放军总医院临床检验科协助进行。
1.3 酶活性的测定
对谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶和天冬氨酸转氨酶的测定，用美国产Monarch Plus全自动生化分析仪进行。
2 结果
2.1 凝血因子Ⅷ促凝活性（FⅧ:C）
在凝血因子中，该因子最易受外界处理因素的影响而破坏。本试验用亚甲蓝光敏法对整袋人血浆处理后，FⅧ:C活性均有不同程度下降，但即使作用30 min，其活性仍保持81.66%（表1），大于国际通用的80%水平。
表1 亚甲蓝光敏消毒法对凝血因子Ⅷ促凝活性的影响
Table 1 Influence of methylene blue photodynamic disinfection on coagulative activities of factor Ⅷ
血浆光敏处理时间Time of photodynamictreatment of plasma（min） 凝血时间Coagulationtime FⅧ:C活性FⅧ:Cactivity(s,±SD)（%）
0 58.8±0.50 100.00
5 59.6±2.61 96.66
10 61.5±2.59 89.77
20 62.3±2.71 86.99
30 63.9±1.45 81.66
注：结果为3次试验平均值。
Note: The results are means of test for 3 times.
2.2 活化部分凝血酶时间（APTT）
此为内源凝血系统较为敏感、简便和常用的筛选试验，反映FⅫ、FⅨ、FⅤ等凝血因子的活性水平。本试验发现，光敏处理5、10、20、30 min，血浆中活化部分凝血酶时间分别延长3.5、6.8、8.2、13.5 s（表2）。临床标本测定值较正常值延长超过10 s以上才有病理意义，其中只有30 min处理超过10 s。
2.3 凝血酶原时间（PT）
该值反映外源凝血系统是否正常。出现凝血所需时间与血浆中凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ有关。上述成分中任何一种成分的水平变化，都会导致凝固时间的改变。本试验中，经光敏处理5、10、20、30 min，血浆中凝血酶原时间分别比对照组增加0.8、1.5、2.6、3.7 s（表3）。只有30 min处理组超过对照组3 s（有病理意义）。
2.4 其它酶活性
于光敏消毒前、后，分别测定血浆中谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、天冬氨酸转氨酶等的活性。试验结果发现，各种酶活性变化无统计学意义（P>0.05），低于10%可接受水平（表4）。
表2 亚甲蓝光敏消毒法对活化部分凝血酶时间 的影响
Table 2 Influence of methylene blue photodynamic disinfection on activated partial thrombo- plastin time (APTT)
血浆光敏处理时间Time of photodynamictreatment of plasma（min） 活化部分凝血酶时间APTT(s,±SD)
0 41.9±1.48
5 45.4±2.55
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